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Fer-color
C
AA
Método colorimétrico direto para a determinação de
ferro em soro ou plasma
SIGNIFICADO CLÍNICO
O ferro encontra-se distribuído no organismo em diferentes
formas que incluem: hemoglobina, ferro tissular e mioglobina.
O transporte de ferro de um órgão a outro realiza-se mediante
uma proteína transportadora: a apotransferrina.
O complexo formado com o ferro é conhecido como transferrina.
A ferritina, localizada em quase todas as células do corpo,
constitui uma reserva de ferro disponível para a formação da
hemoglobina e outras proteínas que contêm o grupo hemo.
A absorção de ferro é realizada principalmente no duodeno. Tanto a ferritina como a transferrina encontram-se nas
células da mucosa intestinal e ambas regulam a absorção
de ferro.
Os mais grandes desordens do metabolismo de ferro
relacionam-se com a deficiência ou excesso. No entanto,
observam-se alterações em muitas outras doenças como
anemia, doenças cardiovasculares, hepatite crônica, doenças renais e infecções.
A anemia por perda de ferro representa um dos transtornos
orgânicos mais freqüentes, principalmente em crianças, mulheres jovens, grávidas e idosos. Também constituem causas
de anemia ferropênica as úlceras gástricas ou duodenais e
carcinoma de estômago.
Por outra parte, o excesso de ferro associa-se com outros
desordens como hemosiderose, hemocromatose e anemia
sideroblástica.
FUNDAMENTO DO MÉTODO
O ferro sérico libera-se de sua ligação com sua proteína
transportadora específica, a transferrina, tampão acetato
de pH 4,5 e em presença de um redutor, o ácido ascórbico.
Depois reage com o reagente de cor, piridil bis-fenil triazina
sulfonato (ferrozina) obtendo-se um produto de cor magenta,
que se mede a 560 nm.
REAGENTES FORNECIDOS
A. Reagente A: solução de acetato 150 mmol/l para pH 4,5
contendo guanidina.
B. Reagente B: ácido abscórbico.
C. Reagente C: solução estabilizada de ferrozina.
S. Padrão: solução de iônes Fe (III) equivalem a 100 ug/dl.
Concentrações finais
Acetato.................................................. 150 mmol/l, pH 4,5
Ferrozina............................................................. 0,2 mmol/l
Ácido abscórbico.................................................. 0,03 mol/l
Guanidina............................................................... 4,0 mol/l
REAGENTE NÃO FORNECIDO
- Calibrador A plus da Wiener lab.
- Água destilada.
INSTRUÇÕES DE USO
Reagente C: pronto para uso.
Padrão: pronto para uso.
Reagente de Trabalho: transferir ao frasco de Reagente B
a quantidade de Reagente A indicada no rótulo. Colocar a
data de preparo.
PRECAUÇÕES
Os reagentes são para uso diagnóstico "in vitro".
Utilizar os reagentes observando as precauções habituais
de trabalho no laboratório de análises clínicas.
Todos os reagentes e as amostras devem ser descartadas
conforme à regulação local vigente.
ESTABILIDADE E INSTRUÇÕES DE
ARMAZENAMENTO
Reagentes Fornecidos: são estáveis sob temperatura
ambiente (< 25oC) até a data do vencimento indicada na
embalagem.
Reagente de Trabalho: é estável por 3 meses a contar da
data de sua preparação conservado sob refrigeração (210oC) ou por 10 dias sob temperatura ambiente (18-25oC).
INDÍCIOS DE INSTABILIDADE OU DETERIORAÇÃO
DOS REAGENTES
Variações nas leituras de Brancos de Reagentes e/ou
Padrão, são indícios de contaminações ocasionais (água,
material de vidro, etc.). Aumento no valor dos Brancos indicará uma contaminação com ferro.
AMOSTRA
Soro ou plasma
a) Coleta: o paciente deve estar em jejum, sendo que as
extrações devem ser realizadas sempre na mesma hora
(preferencialmente de manhã) já que as oscilações fisiológicas são muito importantes durante o dia.
b) Aditivos: se a amostra é plasma deverá utilizar-se heparina como anticoagulante.
c) Substâncias interferentes conhecidas: não se observa
interferência pela hemoglobina até 90 mg/dl, bilirrubina até
15 mg/dl, nem heparina até 50 UI/ml.
Amostras lipêmicas podem levar a resultados errôneos.
Níveis de triglicerídeos de 3,72 g/l produzem interferências.
Embora hemólises ligeiras não interferem com este método,
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o International Committee for Standardization in Hematology
(ICSH) recomenda a utilização de soro livre de hemólise.
Referência bibliográfica de Young para efeitos de drogas
neste método.
d) Estabilidade e instruções de armazenamento: o soro
e o plasma heparinizado podem ser conservados até uma
semana sob refrigeração (2-10oC).
MATERIAL NECESSÁRIO (não fornecido)
- Espectrofotômetro ou fotocolorímetro.
- Micropipetas e pipetas para medir os volumes indicados.
- Tubos ou cubetas espectrofotométricas.
CONDIÇÕES DE REAÇÃO
- Comprimento de onda: 560 nm em espectrofotômetro ou
540-560 nm em fotocolorímetro com filtro verde.
- Temperatura de reação: temperatura ambiente
- Tempo de reação: 5 minutos
- Volume de amostra: 200 ul
- Volume total de reação: 1,4 ml
PROCEDIMENTO
Em três tubos marcados B (Branco de Reagente), P
(Padrão) e D (Desconhecido), colocar:
Água bidestilada
B
P
D
200 ul
-
-
Padrão
-
200 ul
-
Amostra
-
-
200 ul
1 ml
1 ml
Reagente de Trabalho 1 ml
Misturar. Ler a absorbância do tubo D (Branco de Soro
BS) em espectrofotômetro a 560/580 nm ou em fotocolorímetro com filtro verde (540/560 nm) levando a zero
o aparelho com água. Depois adicionar:
Reagente C
200 ul
200 ul
200 ul
Misturar imediatamente. Voltar a ler cada tubo em 5
minutos, levando o aparelho a zero com água.
ESTABILIDADE DA MISTURA DE REAÇÃO FINAL
Os tubos devem ser lidos entre 5 e 60 minutos após completados os passos do procedimento.
CÁLCULOS DOS RESULTADOS
Corrigir as leituras de P e D, subtraindo os Brancos correspondentes:
P - B = P corrigido
D - (B + BS) = D corrigida
Fe (ug/dl) = D corrigida x f
100 ug/dl
onde: f =
P corrigido
lidade (Standatrol S-E 2 niveles) com concentrações
conhecidas de ferro, com cada determinação.
VALORES TEÓRICOS
Homens: 65 a 175 ug/dl (11,6-31,3 umol/l)
Mulheres: 50 a 170 ug/dl (9-30,4 umol/l)
VALORES DE REFERÊNCIA
Em um grupo de 20 mulheres e 20 homens sadios, com
idades entre os 18 e 51 anos, foram encontradas faixas de
55 a 175 ug/dl* com as seguintes médias:
Homens: 114,6 ug/dl (20,5 umol/l)
Mulheres: 103,3 ug/dl (18,5 umol/l)
*Valores de referência extraídos de arquivos da Wiener lab.
É recomendável que cada laboratório estabeleça seus próprios valores de referência.
CONVERSÃO DE UNIDADES AO SISTEMA SI
Ferro (ug/dl) x 0,179 = Ferro (umol/l)
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
- Valores de Branco aceitável: a determinação de oligoelementos comprometem as possíveis contaminações de
água e os reagentes. O Branco de Reagente, realizado
segundo o Manual de Instruções, não deve superar 0,150 D.O.
devendo ser ainda desprezível a contribuição de água no
Branco. Para poder ser controlado, recomenda-se o uso
de água de qualidade comprovada (condutibilidade menor
a 0,02 uOhms).
- Limpeza do material: todo o material do laboratório utilizado
deve estar livre de ferro, submergindo-o durante 6 horas em
HCl p.a. 10-15%, eliminando a acidez com vários lavados
com água livre de ferro. Enxugar o material perfeitamente
à temperatura não superior a 80oC em cesto de aço inoxidável ou recoberto com plástico. Todo o material deve ser
utilizado só para a determinação de ferro.
DESEMPENHO
a) Reprodutibilidade: processando duplicatas das mesmas
amostras no mesmo dia, foram obtidos os seguintes dados:
Nível
146,5 ug/dl
324,6 ug/dl
D.P.
± 1,93 ug/dl
± 1,76 ug/dl
C.V.
1,32 %
0,54 %
Processando a mesma amostra em diferentes dias, obtevese o seguinte:
Nível
142,8 ug/dl
314,0 ug/dl
D.S.
± 2,50 ug/dl
± 3,93 ug/dl
C.V.
1,75 %
1,25 %
b) Recuperação: adicionar quantidades conhecidas de Fe
(II) a alíquotas de um mesmo soro, recuperou-se entre 90
e 103%.
c) Linearidade: a reação é linear até 1000 ug/dl.
d) Limite de detecção: 6,05 ug/dl.
MÉTODO DE CONTROLE DE QUALIDADE
Processar dois níveis de um material de controle de qua-
PARÂMETROS PARA ANALISADORES AUTOMÁTICOS
Para a programação consultar o manual de uso do analisador
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a ser utilizado. Para a calibração deve-se utilizar Calibrador A plus da Wiener lab., segundo os requerimentos do
analisador.
SÍMBOLOS
Os seguintes símbolos são utilizados nos kits de reagentes
para diagnóstico da Wiener lab.
C
APRESENTAÇÃO
- 5 x 20 ml (Cód. 1492003).
REFERÊNCIAS
- Dixon, K. - Ann. Clin. Biochem. 10/5:127 (1973).
- I.C.S.H. - Am. J. Clin. Path. 56/4:543 (1971).
- Zak, B.; Baginski, E.S.; Epstein, E. y Wiener, L.M. - Clin.
Toxicol. 4/4:621 (1971).
- Rojkín, M.L.; Olguín de Mariani, M.C.; Drappo, G.A. y
Albarracín, A. - III Congreso Argentino de Bioquímica Buenos Aires (1975).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 4th ed., 2001.
Este produto preenche os requisitos da Diretiva Européia
98/79 CE para dispositivos médicos de diagnóstico "in
vitro"
P Representante autorizado na Comunidade Européia
V
Uso médico-diagnóstico "in vitro"
X
Conteúdo suficiente para <n> testes
H
Data de validade
l
Limite de temperatura (conservar a)

Não congelar
F
Risco biológico
Volume após da reconstituição
Cont.
Conteúdo
g
Número de lote
M
Elaborado por:
Xn
Nocivo
Corrosivo / Caústico
Xi
i
Calibr.
b
b
c
h
Irritante
Consultar as instruções de uso
Calibrador
Controle
Controle Positivo
Controle Negativo
Número de catálogo
Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
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UR130115