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HPC005 Rev.00 Date 2014.11
A formulação do terreno MSwab™ foi desenvolvida para ser compatíve com PCR Master Mix, isto torna MSwab™ apropriado para aplicações diretas de amplificação
de ácidos nucleicos sem a necessidade de uma passagem de extração standard e de purificação.
Duas metodos diferentes (A e B) podem ser aplicados para o processamento das amostras MSwab™:
A) Métodos de extração standard
1. Misturar o tubo de ensaio MSwab™ num vortex por 10 segundos, desenroscar a tampa e, segurando-a entre o polegar e o indicador, agitar para fazer
sair a maior parte do fluido da ponta.
OBS.: A tampa com a característica especial de fixação da haste não é prevista para os tampões perinasais (6E013N) que, sendo muito flexíveis, não podem ser
bem bloqueados no interior da cavidade. Neste caso, após ter deixado sair o fluido do pontal, extrair o aplicador do tubo de ensaio utilizando uma pinça.
2.
Eliminar o zaragatoa e transferir o quantitativo de amostra apropriado (es. 200 ul) num tubo de ensaio de extração seguindo os procedimentos normais
do laboratório.
3. Seguir de acordo com os procedimentos de extração e amplificação dos kit utilizados
O sistema MSwab™ foi convalidado com os seguintes metodos de extração: membrana de gel-silice (Qiagen, Macherey & Nagel), berlindes magnéticos (EasyMAG,
Qiasymphony, Magnapure). Outros métodos de extração são aplicáveis com convalidação prévia.
B) Métodos de extração rápida
Para a pesquisa de contaminação viral, aconsehamos uma passagem de shock térmico para alisar as amostras.
1. Agitar o tubo original da amostra MSwab™ por 10 segundos.
OBS.: A tampa com a característica especial de fixação da haste não é prevista para os tampões perinasais (6E013N) que, sendo muito flexíveis, não podem ser
bem bloqueados no interior da cavidade.
2. Utilizando uma micro pipeta, transferir 200 ul da amostra MSwab™ num micro tubo de ensaio estéril com berlindes de vidro (2E013S50: tubo de ensaio
Copan com berlindes de vidro, disponível em separado) e agitar por 10 segundos. Conservar a amostra de MSwab™ original para a cultura ou testes adicionais.
3. Aquecer o micro tubo de ensaio num termóstato programado a 98º-100ºC pelo menos:
-3 minutos para Vírus
- 10 minutos para Bactérias gram positivas
- 5 minutos para Bactérias gram negativas
4. Arrefecer o tubo de ensaio a temperatura ambiente por 5 minutos
5. Centrifugar o mini tubo de ensaio a 10000xg por 2 minutos para sedimentar os detritos celulares.
6. Transferir uma alíquota da amostra MSwab™tratado na master mix e continuar com a passagem de amplificação de acordo com o procedimento do
kit de amplificação.
O método de extração rápida descrito acima foi testado com R-Biopharm RIDA®GENE Real Time PCR kits, Seegene Anyplex FluA/B Typing Real Time detection
kit e com Genesig Real Time PCR kits by Primer Design em comparação com métodos de extração rápida. Outros métodos de extração PCR são aplicáveis com
convalidação prévia. As grelhas testadas incluem: B. pertussis (ATCC 8467), S. aureus (meticillina resistentes) (ATCC 43300), E. coli O157-H7 (ATCC 700728), S.
tiphimurium (ATCC 14028), C. dificil (ATCC 9689), Gripe A virus (ATCC VR-822), Gripe B virus (ATCC VR 786), Neisseria gonorrhoeae (ATCC 43069) e Chlamydia
trachomatis (ATCC VR880). Os testes não foram conduzidos utilizandos matrizes de origem humana.
Os resultados obtidos dependem totalmente do modo correto das operações de recolha, transporte e análises de laboratório.
CONTROLO QUALIDADE
Os aplicadores MSwab™ são testados para garantir que não sejam tóxicos para as bactérias. O terreno de transporte e os aplicadores MSwab™ são testados
para garantir que não sejam tóxicos para as linhas celulares usadas para a cultura de HSV 1 e di HSV 2. O terreno de transporte MSwab™ foi testado em relação
à estabilidade do pH e pela ausência de inibidores através de técnicas de amplificação direta (9). O MSwab™ é submetido a testes de controle qualidade antes da
comercialização em relação à sua capacidade de manter a vitalidade das bactérias Gram positivos aeróbicas e anaeróbicas facultativas e dos virus HSV a temperatura ambiente (20 – 25° C) por períodos específicos. Os processos de controle qualidade dos dispositivos de transporte micro biológico devem ser efectuados
conforme os métodos de testes descritos pela Clinica and Laboratory Standards Institute M40-A e por outras publicações (9), Caso se notem resultados de controle
aberrantes, os resultados pacientes não devem ser levados.
RESTRIÇÕES
1.
No laboratório, durante a manipulação dos campos clínicos, usar luvas em látex e todos os outros dispositivos de protecção necessários. Durante a
manipulação ou das análises de amostras paciente, respeitar o nível de bio segurança 2 estabelecido pelo CDC (31, 32, 33, 34).
2.
As condições, o tempo e o volume das amostras recolhidsa para a cultura são elementos significativos para obter resultados de confiança. Seguir as
linhas guia recomendadas para a recolha das amostras. (7, 8, 4).
3.
MSwab™ é destinado à utilização de terreno de recolha e transporte para a cultura de bactérias Gram positivas aeróbicas e anaeróbicas facultativas,
virus HSV 1 e HSV 2 e paa a pesquisa de ácidos nucleicos de bactérias e virus,
O MSwab™ não pode ser usado como terreno de enriquecimento, de selecção ou diferencial.
4.
O terreno de cultura MSwab™ não contém antibióticos. As amostras paciente que possam conter uma carga elevada de contaminantes bactéricos podem
exigir a adição de antibióticos ao terreno de manutenção e cultura das celulas.
5.
Os testes de performance de Copan MSwab™ foram efectuados utilizando grilhas de laboratório aplicados num zaragatoa seguindo os protocolos de
testes descritos nos Clinical and Laboratory Standards Institute M40-A Approved Standard (9). Os testes de performance não foram efectuados com a
utilização de amostras humanas.
6.
Os testes de performance de Copan MSwab™ foram efectuados utilizando tampões flocados Copan.
ADVERTÊNCIAS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Para utilização diagnóstica em vidro.
Não esterilizar novamente os tampões inutilizados antes da utilização.
2 Este produto é exclusivamente descartável; a sua re-utilização pode causar risco de infecção e/ou resultados não exactos.
Não re-embalar.
Não utilizar para aplicações diferentes da utilização estabelecida.
A utilização do produto com um kit de diagnose rápida ou com instrumentos diagnósticos deve ser validado à prior pelo utilizador.
Não utilizar em caso de evidentes sinais de danificação (ex., ponta ou haste do zaragatoa partidos)
Não forçar ou prensar de modo excessivo na fase de recolha das amostras dos pacientes, dado que pode provocar a ruptura da haste do zaragatoa.
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