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Gélose de MacCONKEY
DOMAINE D’UTILISATION
La gélose de MacConkey est un milieu sélectif utilisé pour l’isolement des Salmonella, des Shigella,
ainsi que des bactéries coliformes dans les eaux, les produits alimentaires, les produits
pharmaceutiques et biologiques d’origine animale. Sa formule est recommandée dans les
Pharmacopées européenne et américaine pour le contrôle des contaminations microbiennes.
HISTORIQUE
La formulation de MacConkey pour l’isolement des entérobactéries a de nombreuses fois été
modifiée depuis l’origine. Celle-ci représente la formule “classique” utilisée depuis de nombreuses
années, par des auteurs tels que Block et Ferguson qui trouvèrent le milieu très satisfaisant pour
l’isolement des Shigella difficiles à cultiver.
PRINCIPES
- L’inhibition des microorganismes à Gram positif est due à la présence de sels biliaires et de
cristal violet. Ce colorant inhibe principalement le développement des entérocoques et des
staphylocoques.
- La fermentation du lactose en acide est révélée en présence de rouge neutre par la formation de
colonies roses ou rouges.
- Les microorganismes lactose-négatif présentent des colonies incolores.
PREPARATION
- Mettre en suspension 50,0 g de milieu déshydraté (BK050) dans 1 litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps
nécessaire à sa dissolution.
- Répartir en tubes ou en flacons.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
NOTA 1 :
Une liquéfaction partielle de l’agar entraînera inévitablement une altération significative de la
consistance du gel du milieu solidifié, après stérilisation et refroidissement.
NOTA 2 :
Le milieu peut être additionné de MUG (4-méthyl-umbelliféryl-ß-D-glucuronide) afin de détecter
Escherichia coli (se référer à la monographie concernant le supplément MUG 50 mg, BS024).
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Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
MODE D’EMPLOI
-
Refroidir et maintenir le milieu à 44-47°C.
Couler en boîtes de Petri stériles.
Laisser solidifier sur une surface froide.
Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert.
Ensemencer en stries l’inoculum à la surface des boîtes afin d’obtenir des colonies isolées.
Ensemencer simultanément un milieu non sélectif tel que la gélose lactosée au BCP (BK023).
Incuber à 37°C de 18 à 24 heures.
LECTURE
Les colonies lactose-positif présentent une coloration rouge et sont entourées d’un halo de sels
biliaires précipités. Les colonies lactose-négatif sont incolores.
FORMULE - TYPE
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Peptone pancréatique de gélatine .................................................17,0 g
- Tryptone ...........................................................................................1,5 g
- Peptone pepsique de viande ...........................................................1,5 g
- Lactose ..........................................................................................10,0 g
- Sels biliaires .....................................................................................1,5 g
- Chlorure de sodium..........................................................................5,0 g
- Rouge neutre ..............................................................................30,0 mg
- Cristal violet ..................................................................................1,0 mg
- Agar agar bactériologique ..............................................................13,5 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,1 ± 0,2.
CONTRÔLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre beige rosé, fluide et homogène.
- Milieu préparé : gélose rouge violacé.
- Réponse culturale typique après 24 heures d’incubation à 37°C (méthode qualitative
d’ensemencement) :
Microorganismes
Croissance
Caractéristiques
colonies rouges
colonies rouges
colonies incolores, sans
envahissement
colonies incolores
Escherichia coli
Enterobacter aerogenes
Proteus vulgaris
ATCC® 25922
ATCC 13048
ATCC 13315
bonne, score 2
bonne, score 2
bonne, score 2
Salmonella Enteritidis
Staphylococcus aureus
CIP 82.97
ATCC 25923
bonne, score 2
inhibée
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STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu déshydraté : 2-30°C.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu préparé en flacons : 6 mois à 2-8°C (à titre indicatif).
- Milieu préparé en boîtes : 15 jours à 2-8°C (à titre indicatif).
Supplément MUG 50 mg :
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
PRESENTATION
Code
Milieu déshydraté :
- Flacon de 500 g
BK050HA
Supplément MUG 50 mg :
- Coffret de 10 flacons
BS02408
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
MacConkey. 1905. Lactose-fermenting bacteria in faeces. J. Hyg., 8: 333-379.
Pharmacopée européenne 4.7. Contrôle microbiologique des produits non stériles. Recherche de microorganismes
spécifiés. Solution et milieux de culture recommandés. Milieu gélosé H : 2.6.13. 4600.
United States Pharmacopeia 26. 2003. Microbial Limit Tests, 2006-2011.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
NF EN ISO 21567 (V 08-411). Mars 2005. Microbiologie des aliments. Méthode horizontale pour la recherche de Shigella
spp.
NF EN ISO 21150 (T 75-604). Septembre 2009. Cosmétiques. Microbiologie. Détection d’Escherichia coli.
Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2010-01-12.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK050/F/2003-01 : 6.
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