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16 Joumada El Oula 1425
4 juillet 2004
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N°° 43
Arrêté du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au 24
mai 2004 rendant obligatoire une méthode de
recherche des staphylocoques à coagulase
positive pour le lait en poudre.
————
Le ministre du commerce,
Vu le décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990,
modifié et complété, relatif au contrôle de la qualité et à la
répression des fraudes ;
Vu le décret exécutif n° 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 décembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu l’arrêté interministériel du 18 août 1993 relatif aux
spécifications et à la présentation de certains laits de
consommation ;
Vu l’arrêté du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifié et complété, relatif aux spécifications
microbiologiques de certaines denrées alimentaires ;
Arrête :
Article 1er. — En application des dispositions de
l’article 19 du décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier
1990, modifié et complété, susvisé, le présent arrêté a
pour objet de rendre obligatoire une méthode de recherche
des staphylocoques à coagulase positive pour le lait en
poudre.
Art. 2. — Pour la recherche des staphylocoques à
coagulase positive pour le lait en poudre. les laboratoires
du contrôle de la qualité et de la répression des fraudes et
les laboratoires agréés à cet effet doivent employer la
méthode d’analyse microbiologique décrite en annexe.
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2°°/ Reconstitution du lait en poudre et préparation
des dilutions.
La reconstitution du lait en poudre et la préparation des
dilutions se font selon les conditions appropriées.
3°°/ Formules des milieux et directives pour leur
préparation.
3.1 Milieu de Giolitti et Cantoni
3.1.1 Milieu de base
Tryptone....................................................................10 g
Extrait de viande..........................................................5 g
Extrait de levure..........................................................5 g
Chlorure de lithium.....................................................5 g
Mannitol....................................................................20 g
Chlorure de sodium.....................................................5 g
Glycine.....................................................................1,2 g
Pyruvate de sodium....................................................3 g
Eau distillée.........................................................1000 ml
Faire dissoudre les produits dans l’eau en chauffant et
en agitant pour obtenir une dissolution complète. Refroidir
à 50-60 °C et ajuster le pH à 6,9 ± 0,1. Répartir à raison
de 19 ml dans des tubes de 20 x 200. Autoclaver 20 mn à
115 °C. Avant utilisation, chasser l’air par chauffage à
100 °C pendant 20 mn. Refroidir.
3.1.2 Solution de tellurite de potassium
Tellurite de potassium.................................................1 g
Eau distillée...........................................................100 ml
Cette méthode doit être également utilisée par le
laboratoire lorsqu’une expertise est ordonnée.
Dissoudre le tellurite de potassium dans l’eau. Stériliser
par filtration.
Art. 3. — Le présent arrêté sera publié au Journal
officiel de la République algérienne démocratique et
populaire.
On devra s’assurer au préalable, par des essais
bactériologiques, que le tellurite de potassium dont on
dispose convient pour cet usage. Il est recommandé en
toute circonstance de porter grande attention et il faut
souligner l’importance d’un choix judicieux de ce produit
en ce qui concerne son origine et les garanties qu’il offre.
Fait à Alger, le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au
24 mai 2004.
Noureddine BOUKROUH.
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ANNEXE
RECHERCHE DES STAPHYLOCOQUES
A COAGULASE POSITIVE DANS LE LAIT
EN POUDRE
1°°/ Principe :
On inocule le lait reconstitué correspondant à 0,1g de
poudre dans des bouillons d’enrichissement (dans celui de
Giolitti et Cantoni ou, s’il s’agit de poudres fabriquées
depuis moins de 15 jours, dans le bouillon salé lactosé au
rouge de phénol). Après incubation, on repique les tubes
sur milieu E.T.G.P.A de Baird-Parker (3.3). Les colonies
de staphylocoques qui se développent sur le milieu de
Baird-Parker sont soumises à l’épreuve de la coagulase.
3.1.3 On prépare en outre une gélose à 2% (dans l’eau
distillée) que l’on stérilise à l’aucolave (20 mn à 120 °C)
et qui sert à former un bouchon anaérobie au-dessus du
milieu liquide (voir 4.1).
3.1.4 Mode d’emploi
Juste avant l’utilisation, chauffer les tubes de milieu de
base (3.1.1) pendant 20 mn à 100 °C pour chasser l’air.
Refroidir à 45 °C et ajouter 0,1 ml de la solution de
tellurite de potassium (3.1.2).
3.2 Bouillon salé lactosé au rouge de phénol
Extrait de viande de bœuf.........................................1,5 g
Protéose-peptone......................................................7,5 g
Chlorure de sodium...................................................75 g
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Lactose.....................................................................7,5 g
Rouge de phénol...................................................0,025 g
Eau distillée.........................................................1000 ml
Faire dissoudre les produits dans l’eau en chauffant et
en agitant pour obtenir une dissolution complète. Refroidir
à température ambiante et ajuster le pH à 7,4 ± 0,1.
Répartir à raison de 9 ml dans des tubes de 18 x 180.
Autoclaver 20 mn à 120 °C.
3.3 Milieu E.T.G.P.A. de Baird-Parker
3.3.1 Milieu de base
Tryptone....................................................................10 g
Extrait de bœuf............................................................5 g
Extrait de levure..........................................................1 g
Chlorure de lithium.....................................................5 g
Gélose................................................................15 à 20 g
(selon le pouvoir gélifiant de la gélose utilisée)
Eau distillée.........................................................1000 ml
Faire dissoudre les produits dans l’eau en chauffant et
en agitant pour obtenir une dissolution complète. Refroidir
à 50-60 °C et ajuster le pH à 6,8 ± 0,1.
Répartir à raison de 90 ml dans des flacons col à vis
bouchés bakélite. Autoclaver 15 mn à 120 °C.
3.3.2 Solution de glycine
Glycine..................................................................... 20 g
Eau distillée...........................................................100 ml
Après complète dissolution, autoclaver 15 mn à 120 °C.
3.3.3 Solution de tellurite de potassium
Tellurite de potassium.................................................1 g
Eau distillée...........................................................100 ml
Après complète dissolution, stériliser par filtration. On
devra s’assurer au préalable, par des essais
bactériologiques, que le tellurite de potassium dont on
dispose convient pour cet usage. Il est recommandé en
toute circonstance de porter grande attention et il faut
souligner l’importance d’un choix judicieux de ce produit
en ce qui concerne son origine et les garanties qu’il offre.
3.3.4 Emulsion de jaune d’œuf
Tremper des œufs frais une minute environ dans une
dilution (1+1000) d’une solution saturée de HgCI2.
Briser les coquilles aseptiquement et séparer les jaunes
des blancs. Mélanger les jaunes avec une solution saline
physiologique (3+7, v/v) pendant 5 secondes environ dans
un mélangeur à grande vitesse.
3.3.5 Mode d’emploi
A 90 ml de milieu de base préalablement fondu et
maintenu à 45 °C ± 1 °C, ajouter aseptiquement les
solutions suivantes amenées à 45 °C :
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a) 6,3 ml de la solution de glycine (3.3.2) ;
b) 1 ml de la solution de tellurite de potassium (3.3.3) ;
c) 5 ml d’émulsion de jaune d’œuf (3.3.4) ;
Bien mélanger les préparations a, b et c dans le milieu
fondu et répartir immédiatement en boîtes de Pétri à
raison de 15 ml par boîte.
Ces boîtes coulées peuvent être conservées 48 heures à
+ 4 °C. Immédiatement avant l’utilisation, étendre sur la
surface des boîtes 0,5 ml d’une solution à 20% (p/v) de
pyruvate de potassium stérilisée par filtration, sécher les
boîtes à 50 °C en position horizontale, la surface de la
gélose en dessus. Inoculer les boîtes dès qu’elles sont
sèches.
Conserver la solution de pyruvate à 3-5 °C et la
remplacer chaque mois.
4°°/ Mode opératoire
4.1 Si la fabrication de la poudre de lait a été faite plus
de 15 jours avant l’analyse, ou si elle est de date inconnue
ajouter 1ml de lait reconstitué correspondant à 0,1 g de
poudre de lait dans un tube de bouillon d’enrichissement
de Giolitti et Cantoni (3.1.4).
Bien mélanger l’inoculum avec le milieu en évitant
toute introduction d’air. On coule ensuite au-dessus du
milieu un bouchon de gélose à 2% (3.1.3) fondue et on
laisse solidifier.
4.2 S’il s’agit de poudres fabriquées depuis moins de 15
jours ajouter 1 ml de lait reconstitué dans un tube de
bouillon salé lactose au rouge de phénol (on peut utiliser
également le milieu de Giolitti et Cantoni comme en 4.1).
4.3 Incuber pendant 24 h à 37 °C l’un et/ou l’autre des
milieux d’enrichissement ensemencés (c’est-à-dire 4.1
et/ou 4.2).
4.3.1 Repiquer selon 4.6 et 4.7 les tubes de bouillon
d’enrichissement de Giolitti et Cantoni présentant un
noircissement ou un précipité noirâtre.
4.3.2 Repiquer selon 4.7 les tubes de bouillon salé
lactosé au rouge de phénol ayant viré au jaune.
4.4. Incuber les autres tubes 24 h supplémentaires et les
repiquer selon 4.6 et 4.7.
4.5 Le procédé pour repiquer les tubes de bouillon
d’enrichissement après leur incubation est donné en 4.6 et
4.7.
4.6 Dans le cas du milieu de Giolitti et Cantoni,
enlèvement du bouchon de gélose selon la technique
suivante :
Avec une spatule, découper le bouchon de gélose selon
deux diamètres perpendiculaires et, si nécessaire, passer
ensuite la spatule autour du bouchon.
Placer le tube sur l’agitateur de façon à faire tomber les
morceaux de bouchon au fond du tube et, en même temps,
mettre les bactéries en suspension.
4.7 Avec une anse de platine, prélever environ
0,001 ml de culture développée dans le bouillon
d’enrichissement, étaler à la surface d’une boîte
renfermant le milieu E.T.G.P.A. de façon à obtenir des
colonies séparées.
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4.8 Incuber les boîtes retournées 24 h à 37 °C ± 1 °C.
4.9 Soumettre au moins 3 colonies typiques à l’épreuve
de la coagulase (4.12). Les colonies typiques de
staphylococcus aureus sont noires, brillantes avec une
mince bordure blanche et entourées d’une zone claire
s’étendant dans le milieu opaque.
4.10 Si au bout de 24 h aucun développement ne s’est
produit ou si l’on observe seulement des colonies
atypiques, incuber 24 h supplémentaires à 37 °C ± 1 °C.
4.11 Si des colonies se sont développées (d’après 4.10)
en soumettre trois au moins à l’épreuve de la catalase.
Pour cela prendre, avec un fil de platine une partie de
chacune de ces colonies et la mélanger sur une lame à une
goutte d’eau oxygénée à 3,0% (10 volumes). Si l’on
observe une production de gaz, soumettre la colonie
correspondante à l’épreuve de la coagulase (selon 4.12).
4.12 Epreuve de la coagulase
4.12.1 Inoculer chaque colonie dans un petit tube
contenant 0,3 ml de bouillon cœur/cervelle stérille.
Incuber 20-24 h à 37 °C ± 1 °C.
4.12.2 Ajouter dans un petit tube 0,1 ml de cette culture
à 0,3 ml de plasma de lapin additionné de 0,1 %
d’E.D.T.A.
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Arrête :
Article 1er. — En application des dispositions de
l’article 19 du décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier
1990, modifié et complété, susvisé, le présent arrêté a
pour objet de rendre obligatoire une méthode de
dénombrement des micro-organismes caractéristiques par
la technique de comptage des colonies à 37° C dans le
yaourt.
Art. 2. — Pour le dénombrement des micro-organismes
caractéristiques par la technique de comptage des colonies
à 37° C dans le yaourt, les laboratoires du contrôle de la
qualité et de la répression des fraudes et les laboratoires
agréés à cet effet doivent employer la méthode d’analyse
microbiologique décrite en annexe.
Cette méthode doit être également utilisée par le
laboratoire lorsqu’une expertise est ordonnée.
Art. 3. — Le présent arrêté sera publié au Journal
officiel de la République algérienne démocratique et
populaire.
Fait à Alger, le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au
24 mai 2004.
Noureddine BOUKROUH.
————————
ANNEXE
4.12.3 Incuber à 37 °C ± 1 °C et examiner les tubes en
vue de la formation d’un coagulum, chaque heure pendant
4 h, puis après 24 h.
5. Conclure à la présence de staphylocoques à coagulase
positive dans l’échantillon de poudre de lait, si trois
colonies au moins obtenues selon 4.9 ou 4.11 coagulent le
plasma de lapin.
————★————
Arrêté du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant
au 24 mai 2004 rendant obligatoire une
méthode de dénombrement des micro-organismes
caractéristiques par une technique de comptage
des colonies à 37°° C dans le yaourt.
————
Le ministre du commerce,
Vu le décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990,
modifié et complété, relatif au contrôle de la qualité et à la
répression des fraudes ;
Vu le décret exécutif n° 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 décembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Méthode de dénombrement des micro-organismes
caractéristiques par une technique de comptage
des colonies à 37°° C dans le yaourt
Objet et domaine d’application
La méthode est applicable aux yaourts dans lesquels
deux micro-organismes caractéristiques sont présents et
vivants.
1°°/ Définition
1.1 Lactobacillus bulgaricus : micro-organisme
thermophile formant des colonies lenticulaires souvent en
forme d’étoile, de 1 à 3 mm de diamètre, sur milieu MRS
acidifié (selon DeMan, Rogosa et Sharpe)
Aspect microscopique : bâtonnets généralement courts,
mais quelquefois de forme allongée. Ils sont non sporulés,
grampositifs, non mobiles, catalase négative.
1.2 Streptococcus thermophilus : micro-organisme
thermophile formant des colonies lenticulaires de 1 à 2
mm de diamètre sur M 17. Aspect microscopique : cellule
sphérique ou ovoïde (Cocci) (0,7 - 0,9µm de diamètre),
par paire ou en chaînes longues. Elles sont gram
positives-catalase négatives.
Vu l’arrêté interministériel du 16 Joumada Ethania 1419
correspondant au 7 octobre 1998 relatif aux spécifications
techniques des yaourts et aux modalités de leur mise à la
consommation ;
2.1 Ensemencement des dilutions décimales de
l’échantillon dans :
Vu l’arrêté du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifié et complété, relatif aux spécifications
microbiologiques de certaines denrées alimentaires ;
— milieu MRS acidifié, suivi d’une incubation en
anaérobiose pendant 72 h à 37° C, pour le dénombrement
de L bulgaricus,
2°°/ Principe