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Sistemas DTS
22. Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y retire la gradilla de la base magnética
del TCS. Agite la gradilla una vez en el mezclador vórtex multitubo. Consulte Notas
de procedimiento, Agitación con mezclador vórtex para los detalles.
23. Coloque la gradilla sobre la base magnética del TCS durante 5 a 10 minutos.
24. Aspire todo el líquido según se describe en los pasos 19 y 20.
25. Después de la aspiración final, retire la gradilla de la base magnética del TCS e inspeccione
los tubos visualmente para asegurarse de que todo el líquido ha sido aspirado y de
que todos los tubos contienen granos de partículas magnéticas. Si hay líquido visible,
coloque la gradilla nuevamente en la base magnética del TCS durante 2 minutos y repita
la aspiración de esa TTU con las mismas puntas utilizadas anteriormente para cada
muestra.
Nota: Se puede aceptar el tubo si después de terminada la aspiración se puede ver
algún grano de partículas magnéticas. Si no se puede ver ningún grano, la muestra debe
volverse a analizar. Si la misma muestra no contiene un grano de partículas magnéticas
en este paso en un ciclo subsiguiente, esto podría ser indicativo de un problema
específico de la muestra. En este caso se recomienda recoger de nuevo la muestra.
D. Amplificación
Si se usa el baño de calor seco/mezclador vórtex SB100, consulte la Hoja de aplicación
SB100.
1. Use la pipeta de repetición para añadir 75 µL de reactivo de amplificación reconstituido a
cada tubo de reacción. Todas las mezclas de reacción en la gradilla deben ser ahora rojas.
2. Use la pipeta de repetición para añadir 200 µL de reactivo de aceite a cada tubo
de reacción.
3. Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y agítelos en el mezclador vórtex multitubo.
4. Incube la gradilla en un baño de agua a 62 °C ± 1 °C durante 10 ± 5 minutos.
5. Transfiera la gradilla a un baño de agua a 42 ºC ± 1 ºC e incúbela durante 5 ± 2 minutos.
6. Con la gradilla en el baño de agua, retire con cuidado la tarjeta de sellado y, con la
pipeta de repetición, añada 25 µL de reactivo enzimático reconstituido a cada tubo
de reacción. Todas las mezclas de reacción deben ser ahora naranjas.
7. Cubra inmediatamente los tubos con tarjetas de sellado nuevas, retire la gradilla del baño
de agua y mezcle los tubos de reacción agitando suavemente la gradilla con la mano.
8. Incube la gradilla en un baño de agua a 42 °C ± 1 °C durante 60 ± 15 minutos.
E. Ensayo cinético doble (Dual Kinetic Assay, DKA)
Si se usa el baño de calor seco/mezclador vórtex SB100, consulte la Hoja de
aplicación SB100.
La pipeta de repetición utilizada en los pasos de hibridación y selección debe utilizarse
de forma dedicada sólo en estos pasos. Consulte Advertencias y precauciones.
1. Hibridación
a. Retire la gradilla del baño de agua y transfiérala al área del DKA. Use la pipeta
de repetición para añadir 100 µL del reactivo de sonda reconstituido a cada tubo
de reacción. Todas las mezclas de reacción deben ser ahora amarillas.
b. Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y agite la gradilla en el mezclador vórtex
multitubo.
c. Incube la gradilla en un baño de agua a 62 ºC ± 1 ºC durante 20 ± 5 minutos.
d. Retire la gradilla del baño de agua e incúbela a temperatura ambiente durante
5 ± 1 minutos.
Ensayo APTIMA COMBO 2
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