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Figure 17 : La GFPmut3 est presente partout dans le cytoplasme.
La membrane est marquee au FM4-64 (rouge), l'ADN au DAPI (bleu) et la proteine GFPmut3 a une
fluorescence verte. L'image de droite represente la superposition des images de la membrane et de la
GFPmut3. Barre, 1 um.
2.2.1.2 Localisation de la proteine recombinante DgcK::GFPmut3
La figure 18 represente un champ de l'image captee en microscopie a epifiuorescence. Une
majorite des cellules ne semble pas exprimer la proteine recombinante DgcK::GFPmut3 qui
est pourtant en condition de surexpression. Ceci peut etre du au mecanisme d'activation du
promoteur
PBAD
du vecteur et de 1'expression qui fonctionne comme un interupteur On ou Off
(Khlebnikov et al, 2001). II est possible d'observer que la fluorescence verte chez certaines
cellules est diffuse partout dans le cytoplasme tandis que chez deux autres, elle forme un point
precis a un pole cellulaire. La presence uniforme de la proteine recombinante dans le
cytoplasme peut indiquer qu'elle a ete produite mais qu'elle n'est pas encore localisee. Le
temps d'induction de 1 h est relativement court. Les plasmides de certaines cellules, par
exemple chez celles nouvellement divisees, ont pu etre induits au moment ou le temps de
l'induction arrivait a sa fin. La proteine exprimee n'aura done pas eu le temps d'initier son
mouvement de localisation. Cette experience de localisation a toutefois ete repetee plusieurs
fois et ce, en ameliorant les conditions de fixation des cellules sur la lame. La localisation a
toujours ete observee comme etant au pole cellulaire chez V. cholerae (resultats non montres).
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