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Substances parasites
LesangdecinqdonneurssainsaétéprélevédansdestubesEDTAetCellSave.Onaajouté
environ800cellulesSKBR-3àcesprélèvements.D’éventuellessubstancesparasites(hémolyse,
5+,lipémie1,94-2,04%degraisseémulsionnée,ictère7,0mg/dl)ontétéajoutéesauxtubes
CellSave afin de déterminer leur effet sur la récupération et la numération des cellules
tumorales. Des échantillons en double ont été traités sur le système semi-automatisé de
traitementdeséchantillonsCELLPREP™etanalyséssurlecytomètredefluxFACSCalibur.Les
échantillonsdesangtotalhémolysé,lipémiqueetictériqueprélevésdansletubeCellSave
n’influentpassurlarécupérationetlanumérationdescellulestumorales.
Tableau 2.Récupérationdescellulestumoralesajoutéespour7.5mldesangentier
Donneur
A1
A2
B1
B2
C1
C2
D1
D2
E1
E2
Mean
SD
#cellules
récupérées
452
445
802
711
580
451
571
642
610
541
581
117
Contrôle EDTA
#cellules
%de
ajoutées récupération
828
55%
828
54%
749
107%
749
95%
771
75%
771
58%
771
74%
771
83%
771
79%
771
70%
75%
17%
CellSave, hémolyse
#cellules #cellules
%de
Donneur récupérées ajoutées récupération
A1
482
696
69%
A2
502
696
72%
B1
514
696
74%
B2
571
696
82%
C1
499
716
70%
C2
470
716
66%
D1
582
716
81%
D2
551
716
77%
E1
571
716
80%
E2
499
716
70%
Mean
524
74%
SD
41
6%
Contrôle CellSave
#cellules
#cellules
%de
récupérées ajoutées récupération
388
696
56%
486
696
70%
689
696
99%
690
696
99%
289
716
40%
272
716
38%
552
716
77%
636
716
89%
526
716
73%
535
716
75%
506
72%
150
22%
#cellules
récupérées
664
691
748
712
568
599
628
549
620
620
640
63
CellSave, lipémie
#cellules
%de
ajoutées récupération
696
95%
728
95%
696
107%
696
102%
716
79%
716
84%
716
88%
716
77%
716
87%
716
87%
90%
10%
CellSave, ictère
#cellules #cellules
%de
récupérées ajoutées récupération
638
696
92%
612
728
84%
678
696
97%
679
696
98%
561
716
78%
514
716
72%
651
716
91%
589
716
82%
554
716
77%
584
716
82%
606
85%
55
9%
Préservation antigénique en vue du phénotypage
La faculté de discerner nettement les différentes populations cellulaires dépend de l’âge
de l’échantillon au moment de l’analyse, sauf si l’échantillon contient un préservatif. La
conservationdesleucocytesrenseignesurlaqualitédel’échantillonlorsdel’analysedes
cellulestumoralescirculantes.Lafigure1estunexempletypiquedeladensitéenantigène
CD45desdifférentespopulationscellulairesdusangprélevédansuntubeEDTAstandardetun
tubeCellSave.Lesangaétéanalysédanslesdeuxheuresquiontsuivileprélèvement,puisune
autreanalyseaétéeffectuéeenviron48heuresaprèsleprélèvement.Ledegrédeséparation
entrelymphocytesetgranulocytesestindiquéparlalongueurdesbarreshorizontalessur
l’axeXdechacundesgraphiques.Laséparationentrelesdeuxpopulationscellulairesdiminue
aucoursdutempsdansletubeEDTA.LaséparationestmaintenuedansletubeCellSave.Les
flèchesdelafigurequipointentsurlespopulationsdelymphocytes,demonocytesetde
granulocytesmontrentledécalagedecespopulationscellulairesliéauvieillissementdes
échantillonssanguins.Ilestainsiplusdifficilededistinguercespopulationscellulaires.
Qualité de l’échantillon
Laqualitédel’échantillonestimportantepourpermettreunedétectioncorrectedescellules
épithéliales rares. L’intégrité des leucocytes dans les échantillons sanguins enrichis de
manièreimmunomagnétiqueencellulesépithélialesaveclesystèmeCELLPREP™représente
uneexcellentemesuredecettequalité.Lafigure2illustrelacolorationnucléaire(DAPI)des
échantillonssanguinsprélevésdanslestubesEDTAetCellSavetraités24heuresplustardavec
unsystèmeCELLPREP™.Lesimagesontétéprisesàungrossissementx10surunmicroscopeà
fluorescence.Alorsqu’unequantitéimportantedematérielnucléaireestprésentedanslesang
prélevédansletubeEDTA,seulslesobjetsronds(leucocytes)sontprésentsdansl’échantillon
prélevédansletubeCellSave.
Figure 2.ColorationnucléairedesleucocytesdanslestubesEDTAetCellSave.
EDTA
Tube CellSave
VeridexLLC
1001USHwy202North
Raritan,NJ08869USA
Téléphone:1-877-VERIDEX(USA)
0080008374339(EU)
AUTOPREP™,CELLSEARCH™,CELLTRACKS™,CELLTRACKSANALYZERII™ANDMAGNEST™sont
desmarquescommercialesdeVeridex,LLC.
Cettetechnologie,ycomprislesproduitset/oucomposantsassociés,ainsiquelesprocédures
etlessystèmesinstrumentauxdécritsici,sontprotégéspardesbrevetsaméricainsetpardes
brevets internationaux correspondants ainsi que par des demandes de brevets en instance,
appartenantàVeridex,LLC,etincluentunouplusieursdesbrevetssuivants:brevetsaméricains
numéros 5,466,574 ;5,512,332 ;5,597,531 ;5,698,271 ;5,985,153 ;5,993,665 ;6,120,856 ;
6,136,182;6,365,362;6,551,843;6,620,627;6,623,982;6,645,731;6,660,159;6,790,366;
6,861,259;6,890,426;7,011,794;7,282,350et7,332,288.Veridex,LLCdétientunelicencepour
certainscomposants,délivréeparStreckLaboratories,Inc.,LaVista,NE,États-Unis,brevets
américainsnuméros5,849,517et5,459,073.
Figure 1.Séparation de groupes de cellules lors du vieillissement du sang prélevé dans
les tubes EDTA et CellSave.
Dispersion orthogonale de la lumière
Dispersion orthogonale de la lumière
EDTAà2hEDTAà48h
CD45-PerCP
décalage
décalage
CD45-PerCP
CD45-PerCP
Dispersion orthogonale de la lumière
Dispersion orthogonale de la lumière
TubeCellSaveà2hTubeCellSaveà48h
CD45-PerCP
décalage
1001 US HWY 202 North
Raritan, New Jersey 08869 USA
1-877-VERIDEX
Ortho-Clinical Diagnostics
Johnson & Johnson
50-100 Holmers Farm Way
High Wycombe
Buckinghamshire
HP12 4DP
United Kingdom
00 8000 8374339 (EU)
Publication juin 2010
631500041_FR
LBL50263