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TEST DE SECURITE ET PUISSANCE DES VACCINS
S T A G E F A O S U R L A P R O D U C T I O N D E VACCi N
D A K A R , D U 17 O C T O B R E A U 5 N O V E M B R E 1 9 8 3
P a r VIGIER M , , F I K R E Y . e t LEFORBAN
Y.
R E F . N081/VIR0
OCTOBRE
1983.
TES? DE SECURITE ET PUISSANCE DES VACCINS
Par VIGI ER M.“, FIKRE Y.% et LEFORRAN Y.-
:.
I NTRODUCT I’ON
Dans les différekits
exposés, sur les différentes productions de vac-
cins, les contrôles speci f iques vous seront exposés. Notre but est de rappeler I es pri ncipes génkaux
de contrôle des vacci ns et de montrer leur
évolution avec les progrès scientifiques. Nous allons insister aussi sur
certai nos règles à observer durant la fabrication même des vaccins, règles
dont le respect i nf 1 uera sur la quai i té future des vaccins puis nous envisagerons successivement les tests d7innocuité
et les tests dqimmunité.
I - Regles de fabrication à respecter
I I - T e s t d9innocuité
I I I - Test de puissance.
P ,L A N
I NTRODUCT LON
I - REGLES DE FABRICAT
l ON
_h... ..I . .
_<_..
.
1 - Contrôle des cellules
a) Gel lules de premiére expiantai-ion
b) Les lignées tel lulaires.
:
2- Le contrô I e des oeufs
,,‘.
(schéma I FFA - CREDO).
3- Le contrôle des mi I ieux et des adjuvants
a)
Milieux
b) Adjuvants.
:i
5:
National
Veterinaty
lnstitute
Debré-Zeit
ti MAISONS-ALFORT (France) Mlssion v6térinai
1;.‘;.f;&
‘:
(Ethiopie).
;.
re française en *Ethiopie.
* Laboratoi re national de I ‘Elevage et de Recherches vetéri
B,P, 2057 - DAKAR-HANN.
nai res
- 2
4- Le contrfjl e des souches vacci na l es .-<
a) ContrClle des nassacjes : souche dgori gi ne, lot de semence,
production industriel le
b) Contr5le
.
des souches avant fabrlcatlon
lot de
.
c) Contr3 I e de I a souche en cours de fabrication..
1 I - TEST DP i NNOCUI TE
l- Vaccin i nacti vé
a)
Contrôle
d’inactivation
b) Contrôle de stéri I il-6
CI Contr&le
d’absence de r6actim
cl) D i s p o s i t i o n s partlcul
locale
ères.
2- Vacci ns vivants
a) Pathogénicit6
résidue le
b) C o n t r ô l e d e l ’ i d e n t i t é et de la purét6
. .
CI I nnocuité proprement d ii-e.
I I I - TEST DE PUISSANCE DES VACCI NS
du vaccin
.,.
A- Test d’immunité sur 1 ‘espèce cible
a) Candi
tions d’épreuve
b) Dose d’épreuve
CI qua I i té de la souche d’épreuve
d) Date de l’épreuve apr&s vaccination
e) Candi
tion de lecture.
B -Test d’immunité sur espèce autre que Ivespèce cible
C- Titrage de I ‘antigène
1 - Vac.ci ns vi vants
. . . ..-
2. - VaGcLns
-1 ~c$jy&.
:,*;
D- Ti -l-rage des ant i corps
.:
E- Contrôles di vers.
CONC LiJS’I ON
._
__.
.
.
--
- 3
l - REGLES DE FABRI CAT I ON
Dans la prodgction
premi èresF’
des vaccins, nous-aurons à uti I iser des “matières
qui peut-mn-t influer sur la qualtté
particulier
Toxicité
sur
leur
primaire
future des vaccins, en
-toxicii%.,,
(transmission de maladies telles
l a maladie d e s muqueuses,‘oncog6nicit&P
que
être rapidement di agnostiquhes,
de vi.rus adventices
tek que la maladie des
if?SkCSeS,
S i CerfaineS
v i r u s lents.,.).
“taxi ci tés” p euvent
les
par exempl e I a présence
muqu@kX?Sj
te!3 COtd’rÔ~eS.~~U~
rants ne permettent pas de détecter I e pouvoi r oncogène de certai nes
lules,
la prkence
de virus
.CE?(
-
lents dans le cerveau ,d’un mouton utilisé
pour la production d’un vacci n contre la rage.
Toxi ci te seconda1
o u retardee,
r e : création d’état d’hypersensibi
Iii-é immédiate
p a r l ’ u t i l i s a t i o n d e m i l i e u x , d’inactivant, e t c . . . n o n
adaptes. Ces états d’hypersensibi Ii-t-6 apparaissent souvent tardivement,
‘.
.
aprQs Ila répétition des vaccinations et c’est au moment de la fabrication
des vaccins que les con-t-rôles peuvent être les plus efficaces.
Nous al Ions donc rappeler quelques règles en ce qui concerne :
l-
le contrijle
des tel lules
2- le contrôle des oeufs
3-
le contrôle des mil ieux - adjuvants
4- la manipulation des souches vaccinales. Le contrôle de leur
antigénicité
avant et durant la fabrication des vaccins.
1 - Le contrôle des tel lules
Nous pensons qu’un servi ce %ultures
tel lulaires” est nécessaire dans
les laboratoires de production pour le contrôle.
a) Les
cellules de première
““““““I”“““““““”
“““““““““”exelantation
““““““““”
Les Gel jules de première explantation que nous uti I isons sont le plus
souvent d’origi ne ovi ne ou bovi ne ; el les présentent moins de danger pour
,I
;
‘.
: CI ; .; .-i
l’homme que les cellules d’o,rigJne simienne (voir e,xposé sur ~a s+curi@
.’
au laboratoire), mais on peut toujours craindre la présence de virus
advent i ces ;
les
virus
cytopathogènes
sont
rapidement
mis
en
. . /
. ..a
évidence
- 4
(épreuve dc séroneutral isation totale du vaccin), Ies.v-i.rus
bien connus non cytopathogEws
(tel
les que certaines souches de In maladie
des muqueuses) peuvent &t-e mis en 6vidence
au glemsa, à I ‘acridi
palhogenes
assez faci
ne orange , des cet I ul’es tkoi’ns
lement (coloration
non i noculEes -‘avec
I a souche vacci na I e . ,. 1, mais i I n’est pas ..!.nterdi t de penser .que certaines
souches de vi rus peuvent ne pas &-tre dCcelEes par de tels tests.
Au loboratoi re de Debré-Zeit, nous avons ajouté aux tests d’ innocuité
normaux,
Ivinjection
I/C à des souris de’O,03 ml de la suspension virale
récoltée, pour les vaccins Peste bovine et Clavelée.
Dans le même esprit, nous nvuti
renales
lisons pour la production des ce! lules
que des veaux et ‘des agneaux nouveau-nés provenant d’élevays
cent t-6 i és .
De pl’us, dans le cas des tests dvinnocuité
Peste bovi ne, nous uti 1 isons des vr3aux
pour les vaccins contre la
sans anticorps contre la Nucosa
disease. Toute apparition d’anticorps contre cette ma tadie 9montrerait
I
une
contamination du vaccin.
b) Les
I ignées
cet lulaires
..---.s~~I..------c1~~~-
.
Le problème principal qui sFest <osé c’est te,,pouvoi r oncogBne de ces
tel lules.
Pour la production de certains vaccins ?I usage
- les lign6es
cei lulaires diplol’des dvorioine
humain9
on uti 1 ise :
humaine : exemple : vaccin
contre ta rane. Pour les vaccins à usage vétérinaire, on utilise en dehors
d e s c c l lules d e p r e m i è r e explantation
- les liy-kes
cellulaires’dl,ploTdes
dvori@ne~animaIe~;
dvoriqine
‘-.
animale : exemple : vaccin
contre la ra2e - I nsti tut Pasteur ;
1
.
.
.
- l e s l i g n é e s tel ulaires n6n diplordes d’origine animate.
On peut se pro-
curer ces cet lui es après que les contrôles aient Até faits dans des
organismes
spéc al Isés de réfkence
(exemple : tel lule Vero pour la
Peste bovine). Le nombre des passaces dol t être I imité.
. . ./ .a.
.
- 5
Le service “cultures tel lulaires U devra donc constituer un stock de
. _ ,. .cellules en azote liquide pour riviterles nassages trop nombreux, Lës
tests ‘principaux qui permettent de suivre ’ l tévolution des I ignées tel lulai res ,sont :
: 2.
- l’étude de la morphologie des cellules,’
,:
‘=, J’étude des antigènes’cel luIaires,
isme (ex : besoins ‘en &rum ‘pour I a croi Ssance),
. i
- l’étude du profil protéinique de ces cellules,
- i’éi-ude du métabol
- l’étude d e l e u r s e n s i b i l i t é v i s - à - v i s d e s diff6rentsv i r u s ,
,.
. ,.
A ces 6tudes s’ajoutent :
- I.a recherche des copfaminants viraux
..
I.
._._-.: .
_
.
_ . .
. Aucun effet cy*-k@‘fhogè.ne en 10 jours de cul ture
l
Aucun agent hémadsorban-t
. Aucunes i ndusions’
(h6maties de pou1 et, humai ns O’, et”cobayes)
(ilemsa, acri di ne orange).
Sur : - cellules primaires. rein de veau
.
-._ .,
- cqe I I u I es V&33
-, tel I ules .BHK.
. -
.’
*
R é s u l t a t : - aucun effet cytopathogène
- aucun pouvoir hémadsorbant
- aucune Inclusion.
_.-.
*’
-..
._
_._ . - - - .
_
l I arrive cependant que des I ignées tel lulai res soient
;
1,. contaminées
.,. :
:
l a l i g n é e lEkVS2 est porteuse d’un vir,us atténué de la peste porcine ;
.... :
.I.
,.
,‘:,: :,
’ ce virus sè retrouve à la fois dans les tel I’ules et dans les milieux de
i ,. ,
.,
culture.
”
,.
’ Recherche d’autres contami
. . . - ‘”
bactériens,
:,,_
Par
,’
nants
‘
-’ fongiques
j..
.‘,
- mycoplasmlques.
; <’
c u l t u r e s sur~milieux
.:
:,i
i<,
!
7.
appropriés.
:
.“.
.’
:
~ k
-: . .
,‘: I
l . ../*.C
. . ‘,
.’
I
.
.
.i
~
,. .:’ “’
l
*
- 6
Recherche d p un pouvo i r oncogène
Inoculation dvoxtraits
de tel lules ou de tel lutes ii dns souris ou
jeunes hamsters déprimes par la cortisone. Observation 60 ,jours.
On ne
doit pas observer de tumeurs.
I nocu I at i on en m8me temps de ce I I u I es tumora les 2 des terroi ns déprimés
à la cortisone. Observation 60 jours. 50 $ des témoins présentent une
tumeur.
2 - Le contrôle des oeufs (Schéma I F FA-CREDO,
Animaux
surpression,
arands
parentaux
élevés
SOUS
voi r annexe).
isol,ateurs,,,
!,e bâtiment est en
les isolateurs sont en surpresslon d’un fi Itre, ces précau-
tions sont co.mplétées par une douche et un sas pour I ’ introduction du
matériel, LPaliment
et l’eau de boisson sont autoclavés.
Ani maux parentaux : comme I es précédents, sont éleves
ment dl-t de skurité
d’a!r fi Itré,
dans un bdti-
et de développement. Le bdtiment est en surpression
i I y a douche et sas de décontamination, l’ai iment a été
préalablement candi ttonné
sous doubl e enveloppe, I ‘eau est décontami née par
un préchauf fage à 80°C.
Ani maux producteurs d’oeufs SPF
Fi Is et fi I les de la colonie précedente sont élevés dans des unit.és
~JUS
grandes de 500 sujets., Le bâtiment est en surpression dvai r fi I tré.
I 1 y a aussi douche et sas.
Les sacs dPaliments
sont sous double enveloppe,
l’eau est décontaminée comme précédemment.
Les ani maux parentaux et grands-parentaux subissent I es contrôles A,
les animaux de production les contrôles E3;~Le~rythme,
nombre d’animaux contrôlés different
recherchés par contre sont les marnes.
des contrÔIe~;“‘lë
selon le type A ou R.
Ces di fféronces
Les agents
existent uniquement
pour des raisons économiques. Dans un petit ‘laboratoire, on peut
elever
la première génération sous Isolateur dans une unité en surpression et
effectuer I es contrôles de type A sur cette seule génération et passer à
la production’des oeufs SPF à la deuxième génération en effectuant seulement les contrôles de type B (projet de Debré-Zeit).
..a / .*.
c
DAT@
OIC CONTROLE
----_._
.;
MALADIE
:
TECNNIQUI
ADEN5VIR5SEi
INFLUENZA nm AI
M. DE GUhmOR5
M. DE MAREK
REOVIROSES
NI. DE NEWCASTLE
EDS 76
BRONCHITE INFECT.
LARYNGOTRACHEITE
LEUCOSES A
LEUCOSES 8
MYCOPLASMO$E
G.
MYCOPLASM5SE
s.
SALMONELLOSES P.
----Y!
?MG
:
...
PmQ
L<’
.
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,
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SU
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SAL
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SAL
LEUCOSES
ENCEPHALOMYELITE
COUL
an.
-
Mkrobcopk
VARIOLE
HAEMOPHILUS G.
.:
~PhlI1
-
PARASIT5SES
SALMONELLOSES
‘.
TABLEhJ
X
cww-9
clbdqw
x
-...
-
-
AD~NOVIRUSES
M. DE GUMBORQ
M. DE MAREK
‘.
...--.
PMG
PMG
?MG
t
REOVIROSES
PMG
.:
il+*
IHA
81s
MYCOPidiSMUSE
‘G.
,.
SA1
SA1
âhL
TABLEAU N“ 2
CONTROLE
DE L’ÉLEVAGE
DE POULES.SPF. .
TYPE s
HAEMOPHKUS G.
--.----
i
CONTROLE
DE L’ÉLEVAGE
DE P6UtES SPF
TYPE A
-l
EEHNIQUI
M#.iA0IE
/
N* 1
DATE DEI CONTROLIS
1
- 7
3- Contrôle des mi I ieux et des adjuvants
:’
a) ---mm-m
Milieux
Dans les mi 1 ieux, sont uti I isées des mati&res premières pcwant être
responsab I es de phénomènes dv hyperse,ns i b i I i -6.
i l semble que les antibiotiques, les sérums hétéroloques,
les s6rums
homologues di3naturés par le formol, les anti-mousses, le carboxymkthyltel 1 ulose, uti l isés dans les cultures en suspension soient responsables
des réactions al lerglques
du type immédiat qui apparaissent entre 1 e-t 8 h.
après I ‘inoculation vaccinale et qui se traduisent par :
. des chocs anaphylactiques mortels le plus souvent par oedème aigue du
poumon,
. des
chocs
anaphylactiques
généraux:
t o i r e s , d i g e s t i ves, dlverses (oed8me
graves
avec
mani
festations
respira-
au ni veau des nasaux, vulve,
I3rmoiement).
. des manifestati ons locales oedème, urticaire.
I i semble d’autre part que les réactlons à type retardé p I us sévère
soient induites par la protéine virale et d’autres protéines hétêrologues,
dont les cellules BHK et les sérums, La sensibilisation à la pro-i-iine
virale apparait graduel lement. En premier I ieu, les proSi nos hét&ologues
non virales induisent un état d’hypersensibilité spécifique qui,
aprk des
sensi bi 1i sations répétees, augmente I qcffet inducteur d’autres protéines
telles que la proSIne virale et autres medicaments.
L’hypcrsensibilit6
retardée, r6véIateur d9un &t-at
antérieur de sensibi-
lisation, s’exprime entre le 1 et 2lè jour. Les réactions apparaissent
graduel l ement et peuvent se I imiter à un eczéma loca I ou général i sé ou bien
devenir une réaction fAbrile générale avec un eczhma, oedhme ou bien être
une encéphal ite al lergique dans le cas de vaccin préparé 3 partir de tissu
nerveux riche en myél i ne. Contrairement
aux
mani festations
non
mortel
les
d’hypersensibi I ité immédiate qui rétrocèdent rapidement, I ‘évolution de
l’eczéma est lente : persistance de plusieurs semaines.
. . ./ . . .
En Ethiopie, nous avons observé des cas très graves d’hypersens
.
.
.___
..“.
immédiate :
i bi I i -6
- réaction. 2 I q inoculation d- vaccin lapi né, ch&: ies vaches iai tières de
.’
race européenne vacci n6es tous 1~s ans contre la peste bovi ne (reaction
probab I ement
due
.
. . ,’aux:: protéi 1’ nes du lapin) p
.--. ,. < __ ._.. .._-:- .-____
.-_I--. . . . . _._. . . .,.. .‘... ..-.--.--A^ ._.__” .,,.,”
- réaction avec le ,vaccin contre la peste.ur,~l.lose (type B) de rriême
vaches laitières de .race européenne,, .réacti.‘ns
chez les
si graves que nous avons
a r r ê t é c e t t e ua.cci na*tl.on, rAactions que .nous a t t r i b u o n s B i “antigène
.-. . _ _
..-_-_.. _,.,_,., _
pasteur-et i i,que I ui-même. Cette hypersensi bi I i té des vaches européennes
est-elle due à une prédispositlon génétique, OU à une augmentation non
spécifique du pouvoir inducteur de I qantigène
pasteurel I ique par des
*.
.-.-,‘.
vaccinations trop fréquentes contre la fièvre aphteuse (3 par an) avec
,‘ :
.
un vaccin prEparé sur EWK (ceci a été signalé pour d9a.utres:hypersensibi:
i i t6s)
ou
enf
i
n
à
une
parenté
antigéniiue
‘entre
les
lyoprotéi nos des
.
.<,
tel lules EY-IK et de I ‘antigène pasteurel’iique.
:,
En pratique :
.
- dnns t o u t e prcjduc+ion,
.-.-a. ..I .- -....... _ . . . . . . “-,__._ __
__
éviter les Protéi nes homologues ‘et hétéro
I ogues
qui. peuvent &re. des’ ‘i nducteurs spéci f i,ques ou ,Iion spécif iqties d p hypersensibilité
;
- changer si n&essai
re de I ignées .ce 1 I u la i res en cas de. ~?CC i nptions r6pé.
.,<.
t6es, C e n t r i f u g e r e t é l i m i n e r l e s d6bt-i;’ tel lulaires. 11 Semble d ’ a u t r e
part
qu’il
y ait des différences entre les différent& iign6es
de cel-
lules EHK dans leur possibi Ii’té d’induire u~é~a~crl,!hypsesensibi
I ité ;
d’où l’intérêt du contrôle de tés lignées du point de vue hypersensibilit6;
- f ai re dos tests d ’ hypersens i b i I 1 té Y exemp+e--t--
f e-..vae&+an.t
i rab i que
recherche du pouvoi r encépha I 1 togène (Svef - Mol davski j et Col I - l nocuiation
d’un culot
de vaccin centrifugé avec de l’adjuvant de Freund
( i a rage, techniques de I aboratoi re, OMS 1.
b) Contrôle
- - - - - - - - - des
- - - - -adJuvants
- -----Exemple : - contrôl e de la Sapon’i
ne
- pouvo i r i tif I’ammai-6 i re I oca I
( exemp I e charbon bactér i d i en 1
- pouvol r toxique général recherché sur cobayes. MALKOVCI
col laborateurs - Pr6paration du vaccin anti-aphteux.
E et
,
*
- 9
4 - Contrôl e des souches vaccina I es
a) Contrôle
des passages
e--m..-..,,.“..-“e-“---Les souches vaccina les risquent de perdre de leurs qua I ii-& par des
passages trop nombreux, Le nombre dos passacles doit donc être ccnt&l6.
A partir de la souche d’origine venue d’un autre laboratoire, on peut
préparer apres un ou pi usi eut-s passages, une r&ol te importante, cette
récolte après mélange set-b répartie dans des flacons scel 15s ; on pcurra
consid&or ce lot comme le futur lot de semence. (Certains I aboratoi res
considèrent ce lot comme souche initiale et *font ensuite des lots de
semence).
A parti r des lots de semence, on fait des lots’ de oroduction industrielle. Ceux-ci sont la récolte mé9angce obtenue aprFs inocul~ation d’un
matériel biologique par un ou plusieurs flacons de lot de semence. Cette
récol te de production 1 ndustri el I e rQparti e en f I acons permettra de produire une skie de lots’ de vaccins f:voir production des vaccins contre la
peste bovine et la clavelée, le lot de vaccins 6-tant le contenu du ou des
flacons de récolte de la production industrielle mélang6
nécessa i re,
avec le tampon
lyophilis6 le même jour dans le même l y o p h i l i s a t e u r .
b) Contrôle
de la souche vaccinal a avant la fabrication dti vaccin
-----I”---_------_-L__________I_________-------------“---~---Exemples : ’
- Vaccin contre la rage : carte des d&term i nants ant igéni quos &tab lie par
l’6tude
des
anticorps
monoclonaux.
- Vaccin contre la fièvre anhteuso : htude sérologique crois& des soustypes de virus aphteux.
Ces études entrent en cause dans la formulation des vscci ns. L’étude
des anticorps monoclonaux a.justif iéi à postkiori I ‘addition de souches
indigènes à la souche fixe dans certains vaccins sud-amkicains.
LP6tudo
des sous types A de virus aphteux isolés.en
Ethiopie, diffé-
rents de ceux employés dans I es vaccins européens, nous a conduit 5 produire
localement un vaccin utilisant une souche A isolée en Ethiopie.
. . ./ ..*
.
- 10
c) Contrôle
de la souche vaccinale au cours de la fabrication
-“------------“r---------I---------------------------Exemple :
- Fièvre aphteuse
1 - Titrage des ant igènes par la fixati on du complement
au cours de la
culture
z- Uti I isation de l’ultracentrifugation
zonale
- rappelons
que
les
antigènes aphteux peuvent contenir, essentiellement d’une part, des
v i rus ou “grandes parti
CU
tes” ayant un diametre de 22 mu et une cons-
tante de sédimentation de 140 S et d’autre part, des capsomères
(ou “petites particules”) de 7 ,rnp de dIamètre et ayant une constante
de sédimentation de 14 S.
Ces particules ont, le. pouvoir de f i xer le camp IQment, mais seules les
premières les 140 S, qu’elles soient infectieuses ou non, possèdent le
,
,
pouvoir
immunogène.
Cette
ultracentrifugationséparant
les
particules
14OS,
suivie dsun titrage par la .fixation du complément a permis une mei I teure
connaissance
de
la
qualité
immunogène
des
antigènes
aphteux.
II”- TEST D’INNOCUITE
Lp i nnocui te et I ‘activité sont I es deux quai i tés Sondamenta les que
tout vaccin doit posséder.
Nous ai Ions étudier :
1°) les caractères d’innocuité se rapportant
inactivés
_
. aux_. vaccins’
,._
2’) les caractères ds innocuité des vaccins. vivants.
l*) Les caractères d* innocuité se rapportant aux vaccins i nactivés
a) Contrôle de l’inactivation
:
.
.
- Les
vaccins
bactériens
---_--_----------“---Le
contr6le
de cette inactivation est relativement facile en utilisant
des mi I ieux de cultures aérobie ou anaérobie appropriés. Remarquons au
passage que la,quantité d’lnactivantà utiliser varie avec les germes en
..* / ..*
- Il
cause 3 $0 de formol est une quant i’t@ s u f f i s a n t e pour i n a c t i v e r l e s
pasteure I I es,
IF:S salrronel les. Pour les pasteuret
les, cette quantit6
de
formi ne peu-t être augmentée au db 12 d e 4 $0 s a n s n u i r e 2 1*sntig~nicit~
du vaccin, 5
?o de formol est nkessaire
pour I v inactivation dè la, culture
de Cl. chauvei , Dans I e cas du vacci n contre le charbon symptomatique, OD
a signa 16 des accidents de vacci nat! cn par i nactivation i ncompI&>
L’i nactivation des cultures ZI 37OC
de spores.
et avec 5 $0 de formol doit durer au
moi ns 5 jours. Le test dv innocui t6 sur ccbayes devra durer au moins 15 jours.
- -.s-Iw-----m---m-m.Les vaccins vi raux
Lvinactivation
du virus doit &tre vErifiEe
avec des techniques fiables.
Exempl e la rage : on admettait chez les anciens vaccins ph6nolés une virulence résiduel le que l’on
la
titrait sur souris. hvec
propriciactone, o n Alimlne tout& virulenka
I es vaccins i nactivés par
rkiduel l e . ActwI lement l a
sensibi lit6 du test d’inactivation est accrue par l’emploi de la concentration du virus ou I ‘emploi de syst&m:z
Fièvre
sensible (cellules + DEAE
pai kxemple).
aphteuse
cJcz.5 cas rie fièvre aphteuse post-vacci
nale ont conduit (21 IX mise en
oeuvre dluno technique de conMIe basée sur I ‘6lution et IYJ concentration
_ . . _
du virus, suivies de son ensemencement sur cultures tel lulaiws sensibles,
.:i
l’inoculation intradermolinguale des vaccins S des bovins sensibIes,ne
permettent pas de garantir b coup sik une inkti vation totale.
a) Contrâle’de
‘la stéri lit6
----_-----_------------- sur milie;
aérobie,
- sur mi 11 eu anaerobi e
- sur mi I ieu. Sabouraud.
.
_
b) Contrôle
de I ‘absence de r6ac-fion I’ocafë anprrna.Ik
------------------------I-,,I,,,,,,,,,,,---~----Ceci est important nour
les vaccins ‘à’
adjuvant ‘hui leux e-t saponinés.
:
CI .v.-..
Dispositions
“BM-w-w-- particulières
w..--a-m-e--:Exemple
vaccin antibrucel
qual it&.
_.
Vérifier cette
lique : non agglutinog&ne.
.
.
.
/
.
.
.
<f
.
- 12
2’) Les caractères d’ innocuité des vaccins vivants
-< . .
a) -Pathoq&nicit6
- - - - - - - - - - - - - -r é- -s-i d- -u-e-l-l eLe contrcîle
de
la
pathogénicité
et_ .^ ne
. satisfait
pas entièrement I 9espri t ; on ne peut pas oublier la possibilité de l’acquisition dPune nouvelle pathogenicit5
est
toujours
par sélection d’un mutant pI.us pathoc@ne,
Cette acquisition a peut-être démontr6e
cibles”;
difficile
par passages sur “espèces non
une souche ERA par passage sur le rat musqué est devenue-Lpathogène
pour un renard.
On a pu montrer aussi que la souche att&uée Flury HEP apres, passages
sur une ligrke de WK21 a regagne une pathogénicité pour les souris adultes
de laboratoi t-c.
Cela implique comme pour l’immunogénicitft,
passages, un respect des conditions de cul’tures,
un contrôle très strict des
un respect du mode d’emploi
(uni quement espèces ou races “ci b îes”).
:Exemples
Charbon bact&i di en
- Souche C5 contrôle de la vi rul ence sur cobayes et I ap i ns - vaccination
unique des bovins, ovins et’ capri ns
- Souche sterne - culture en sérum et sous CO2.
Péri pneumoni e’ bovine
.
._ _.
- Souche Tl 44ème passage : utiliser cette souche uniquement chez te zébu.
Inoculation à la queue.
- Souche Tl SR 47ème passage : peut ‘être uti Iisée chez..le zébu en S/C pas
chez les taurins et les métis dans certa.i.,nes
‘
régions., ,
- Souche KH3J 92ème passage peut être ut-i I isée pour toutes les races bovi nes.
Signalons que la pathogénici té rbsiduel
.; .-<le peut n’apparaitre qu9après
un très grand nombre de vaccinations : exemple : les souches avianisées,
uti I isbes dans I ‘Est africain qui ont occasionné des formes pulmonaires
de
péripneumonie
,.,.
bovine, formes transmissibles d9animal à animal.
. . ./ . . .
- 13
_.
. ,. “, r -. *
Rage
,. .
\
- Souche Flury LEP réservée à la vaccination du chien.
Newcast I c
Oi sti ticti on entre I es souches rnEsog&nes
et l entogènes, Pour certa i nes
souches dont la souche LASOTA, la d’iffusion c?st admise.
Peste
bovine
e
Souche semble-t-ii fi xée, apnthog&ne pour tous les bovi des, ne diffuse pas (test de non dl ffusion rkessai
Pourtant, certai
re dans le contrôle du vacc i n ) .
ns pays ont émis des objections à ! ’ importation des bovi ns
vacci nés avec la souche atténuée de PLOWRI
CtiT et FERRI S.
b) Contr6le
de l’identité et de la euret6
du vaccin
-----------“---~----11---1-------~--““---m--e---IIe
Comp leter
l
les tests precéd,ents par :
seroneutra
I i sation compl
e-te (absence de contaminants)
;
”
.
.
.
.
.
. c u l t u r e s - identification de la souche vaccinale. Recherche de
<_..,
contami nants eventue Is
. 6tude
des marqueurs : exemple : streptomycine - rkistance
de la
souche Tl.
CI -“-e---m..”
Innocuité proprement
- - - - e - - - - - edite
---
,.
.
.
-,-.:.
.
- 1 nnocui i-6 pour les “especes cib I es”
- Innocuitb
l
secondaire :
stir espèces non sensibles F)attoxiques, viraux, baci-br i ens
la recherche des centarinants
. recherche des effets secondaires : formation dqagglutinines
(exemple : vaccin 9 R contre la typhose).
Pour,, les vacci ns vivants ou i nactivds,
contre lesquels nous nvavons
i l est des effets %Xi ques”
guère de.possibilitB
de lutter mais que nous
signalons.
:
. . ./ ..*.
- 14
- Hypersensibi Iii-6 de type immediat
- provoqui? .par I ‘antigène“_ lui-même
:
.
snt i gènes bactori ens : Bruce1 la, Bordetel le, Pasteurel la . . .
.<
_.< . antigènes vi raux.
Les accidents de gestation chez les truies vacc!~~~s,l,~contamin~es
l e v i r u s d’Aujesky
par
sont une manifestation
imm6dia-te.
. dvhypersensibilit6
__
.I-
- Phhnomène dvArthus : ia KBratite
post-vaccinale chez le chien contamit-
immunisi à l’aide du vaccin de 13 mnladie de Rubarth (Adênovirus canin
t y p e II.
- Hypersens i b i I i -6 retardée, Caus&a pqt- des prot&i nes virales.
Singalons enfin des accidents comme clui-ci qui mettent en cause
I’uti lisation des vaccins vivants. COestainsi qu’i I a été dit qu’un veau
contaminé in utero par le vi rus de la maladie des muqueuses es+ctevenu
immunotol6rant à ce vi rus ; vacciné ensuite lorsqu’il ‘a éliminé Ivimmunité
_’
maternel le i I ne pourra éviter de présenter une maladie des muqueuses ‘provoqu6e
par la souche vaccinale à pouvoir pathogene résiduel très faible.
I I I - TEST DE PUI SSANCE DES VACC I NS
..
Les contrôles dvactivi-t& seront :
A - Test dvitimunit6
*
sur l’espèce cible : exemple : vaccin Flury LEP : sur
le chien.
B - Test dv imrituni té sur les especes
. .
non cibles : dans” ie cas où i l aura 6tit
possible de montrer une bonne corrG.lation entre les deux tests.
C- Par titrage des antigènes.
D’- Par contF0le des anticorps sur les animaux vaccinés.
E - Divers cohtrôles
Toüs d’abord signalons que lorsque l’on fait
tests dvsctivité,il
. .-. les
.,.
faut que le mode d’emploi soit bien respecté.
_ ..-- -..
.’
l
*. /l
.
.
- 15
1°i Voie dPinoculation
du vaccin
- Scarification :
varioic
aviilire
bz&bridicn
- l ntradermi que : certa i ns vacci ns contre le chat-b29
- Scw+cGîanée
.
: la pluwrt
des vaccins
- l n-i-w-muscu lai re : Souche FI ury LEP
- i-Jssale
: Newcastle
- Orale
: Newcast I e
- Oculaire : Souche B 19.
Le respect de la voie dv iw,cuI;~ticn
s’é-tahl
sur les
isso
la voie d’inoculation peut avoir une influence
; d’autre part,
nui sances secondai res
n90ccasiontw
pour que I 9 immunité
est rkessaire
C?X<%l[~ l (i
:‘par
voie
oculaire la souche B 19
pas la formation d!agglutinines.
2’) Le mode de conservation
- 2o”c + 4OC.
:Exemple
un vaccin gel alumine ne peut être congel&.
3’) Les vresp?Xes
transmettrt?
ci b I es” : chien pour la souche FI ury LEP. Sinon danger de,
I a ma I ad i e.
.
4O)
.,
.<...
._ .
Le moment de la vaccination
- Problème des anticorps
- San-i6
ma-i-erreIs
de I ‘animal, e t c . , .
I.. -
A - Test d9it%munit6 sur les espkes cibles
La chose est simple quand,
par’ i9inoculation
de l’acent
I 9affection
est automatiquement.provoquée
causal. Ce n’est pas toujours le cas : Salm
Salmonelloses aviaires - Péripneumonie bovine. Ainsi :
a) Les conditions d’épreuve devront être bien definies.
<.. _ . -. ,
-_..
Exemples :
- Inoculation
Intradermique : ClavelCk
Sous-cutanke
I ntramusculaj
: Charbon bactéridien - Peste bovine
re : Qage - Charbon symptomatique
I ntradermo I i ngua I e : Fi èvre aphteuse,
.
. . ./ . . .
*
- 10
.
- Contact
.
.
.
On infectera des animaux :
- oralement avec des artifices : Salmonellose
- p a r in-tuba-t ion endobronchiale (broyats
pst-i pneumon ique,
bouillon)
de poumons, lymphe
: Péri pneumon i e bov i ne.
Ces animaux seront mis en contact avec des anisnaux vaccinés.
b) La dose d’épreuve doit être aussi définie
Pour tous les vaccins,
nies. Exemples :
les normes internationales nvont pas été défi..
- Charbon bacteridien : ‘norme définie) : 1 000 DLM pour les ovins
- Charbon symptomatique (norme non definie).
.
Pour certains pays, envi ron 10 DLM, souche entretenue en h&mocul ture
(Debré-Zei t) .
- Peste bovine : 10
000
doses
infectieuses
bovines.
c> La qualité de la souche d’Épreuve peut être précisée
- Rage - Vi rus d9épreuve standard CVS
- Newcastle - avant d9être utilisée, une souche d’ép,reuve doit
être titrée sur poulets pour déterminer la dose Iéthale 50.
Toute souche d’6nreuve doit avoir une dose <..t éthai,e
dont le titre sur oeuf est inférieur à 103.
.50 poulets
d) Date dé l’épreuve après la vaccinai-ion
Ceci permettra de déterminer la durée et la précocité de 19immunlt6.
e) Les conditions de lecture doivent &tre prbcisees
Survie
Comparaison
100
avec
$. Pourcentage de survie. Pourcentage
les
-
de
contamination.
témoins.
.
.
/
.
l
*.
- 77
6- Test d’immunitQ
sur les espkes autres que l’espke cible
Les tests d’immunit6
peuvent Ê!tre effectu6s sur d’autres espéces que
les es~ecss cibles quand il a ca-t%
entre
possible de CI%;3
I et- une bonne corrélation
I es deux tests. Cvest I e c a s :
- de la rage : test dvimmunit6
effectué sur sauris cobayes
Les conditions, la date de Vac:cination,
de I 9epreuve,
prkisk
les vo~esdvinocuIation,
la date de 1’6preuve,
la dose
les conditions de lecture, sont
(voir la rage : technique de- laboratoire OMS)
- du charbon bectéridien : test sur cobaye, dose rIrepreuve
200 DLri.
Souche
P a s t e u r I I (17 3 B).
_
C- Titrage des antigènes
._
1) Vaccins vivants : pour les vaccins vivants, i I est possible d’avoir
une bonne idée de leur valeur par titrage.
. Sur cet lulcs : exemple : peste bovine au moins 1@295 DCT~O par
dose vaccinale.
.
SUT coüfs
exemple : Newcastle chaque
dose
vacci na le dei t avoi r,
.
.“.
sur oeuf, un titre de 107 Dl/50.
. Sur’souris
:
: exemple : titrage du vaccin FI ury LEP par voie
i ntrac6r@bra 1e.
. Sur’mi
I ieux de culture
Charbon bacteridien
vaccinale
au mcins 107
spores (souche sterno)
par dose
bovinc.
Wri pneumonie bovi
. *- ne. Souche Tl au ”moins - 107 qermes
vaccinale.
par dose
2) VacCi ns i nacti vés
Titrage de fvantigkne
de
la
: vaccin contre le fi Awrc aphteuse (au ccurs
fabrication).
. Vaccin contre les pnsteurel
ioçés : au moi ns 20 mc) de bactéries
seches par dose vaccina le.
l
Titrage des anatoxines par f loculation - Vaccin contre le -@tanos.
. . ./ .*.
- 18
D- T i t r a g e d e s a n t i c o r p s
,
,,_.
_
I I y ;t parfois corrélation entre
_,
.
la prkence
de cet-i-ai ns anticorps et
le degr6 dP immunité.
Exemp I e : Peste bovine : test de s6roneutra.l
isation de Plowright et Ferris
Newcast I e : t e s t d ’ i n h i b i t i o n d e ’ IVhemagglutination
: séroneutra I isation sur souris - reduction
de plages.
Rage
du nombre
Actuellement, on espke que le test ELISA pourra rendre de grands
services dans I 9estimation du taux dq immuniti3 des troupeaux en ce qui
concerne la fièvre aphteuse et peut-être la peste bovine.
E- Contr6ies~divers
*t-mi les contrôle divers pouvant être faits concernant i9activité
des vaccins, on peut citer :
- le pH,
le pour les vaccins iyoph i I isés,
- l’humidité rkiduel
- le vide pour ces mêmes vaccins, si I ‘ a z o t e n 9a pas é-t6 uti lis& pour le
remp i i ssage,
- la stabilité des adjuvants. Exemple : vaccin huileux contre le Newcastle,
la fièvre aphteuse,
CONC,LUS
ION
Nous avons, nous I q espérons9 montré la nkessi
-te de vacci ns de mi eux
en mieux définis. Nous limiterons ainsi les effets secondaires. Nous pouvons
esperet- pouvoir créer des vaccins ade plus en plus spécifiques avec les sousuni tés antiganiques
pr6parées peut-être au moyen du cjénie géndtique.
les pro-l-bines 6trangères
assocjations
antig6niques
él iminbes,
Ainsi
on peut espérer pouvoir i nst.ituer
des
plus nombreuses. La seule difficulté résidera
peut-être au niveau de I ‘adjuvant qui sera necessai re pour 1 ndui t-e une
bonne immunité, ces sous-uni-tes antigéniques étant plus spécifiques mais
peut être moi ns i mmunogén i ques .
- 19
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européenne pour'le
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22 - 2 4 octobre 1971 - Tubingen
23 - 2 6 septembre
RFA
1975 - Brescia - ltaly.
contrble
de la fi8vrc
aphteuse.