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8
卜
〇
A
(12) 特 許 協 力 条 約 に 基 づ い て 公 開 され た 国 際 出 願
(10) 国 際 公 開 番 号
(43) 国 際 公 開 曰
2012 年 11 月 29 日 （
29.11.2012)
W 画P O
国際特 許分 類 ：
(51)
C07K
16/28
国際 出願 番 号 ：
(22)
国 際 出願 日：
指定国 （
表 示 の な い 限 り、 全 て の 種 類 の 国 内 保
護 が 可 肯 ) : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA,
(81)
(2006.01)
(21)
W O 2012/160678 A 1
PCT
C12P 21/08
(2006.01)
BB,
PCT/JP20
年
201 1
5
月
1 1/062007
曰（25.05.201 1)
25
BG,
BH,
BR,
GB, GD,
GE, GH,
JP, KE, KG,
(25)
国際 出願 の 言 語 ：
日本 語
LT,
(26)
国際 公 開の 言語 ：
日本 語
MY,
(71)
出願 人 （
米 国 を 除 く全 て の 指 定 国 に つ い て ）
：国 立
大 学 法 人 ί 球 大 学 (University
o f the Ryukyus)
〒 9030213 沖 緙 県 中 頭 郡 西 原 町 字 千 原 1
[JP/JP];
番 地 Okinawa (JP). 株 式 会 社 琉 球 免 疫 研 究 所 (Ry〒 9042234 沖
ukvu Immunology
Corporation)
[JP/JP];
緙 県 う る ま 巿 字 州 崎 5 番 地 1 Okinawa (JP).
LU,
KM,
LY,
MZ,
発 明 者 ；お よ び
発 明者 /出願 人 （
米 国 に つ い て の み ) ：田 中 勇 悦
〒 9030215 沖 緙 県 中 頭 郡
(TANAKA,
Yuetsu)
[JP/JP];
西原 町字 上原 2 0 7 番 地
国立 大学 法 人琉球 大
学 大 学 院 医 学 研 究 科 内 Okinawa (JP).
(75)
代 理 人 ：秋 山 敦 ， 外 (AKIYAMA,
Atsushi
東 京都 港 区虎 ノ門 3 丁 目 5 番
1050001
ョ3 7 森 ビル Tokvo (JP).
(74)
；〒
号虎ノ
et al.)
1
GM,
BZ,
CA,
DO, DZ,
GT, HN,
KP, KR,
MD,
ME,
CH,
HR, HU,
KZ,
LA,
MG,
CL,
ID,
CO,
YL, IN,
LC, LK,
MK,
NG, NI, NO, NZ, OM,
TN, TR, TT, TZ, UA,
CN,
EC, EE, EG, ES, FI,
MN,
IS,
LR, LS,
MW,
MX,
PE, PG, PH, PL, PT,
SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM,
TH, TJ, TM,
ZA, ZM,
BY,
DM,
KN,
MA,
NA,
RO, RS, RU,
(72)
BW,
CR, CU, CZ, DE, DK,
ST, SV,
UG, US, UZ,
VC,
SY,
VN,
ZW.
指定国 （
表 示 の な い 限 り、 全 て の 種 類 の 広 域 保
護 が 可 肯巨）
：ARIPO (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW,
ユ ー ラ シア
MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW),
ョ一 ロ ッパ
(AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM),
(84)
丁
5o
7
2
5
(AL,
AT,
BE, BG, CH, CY,
CZ, DE, DK,
GB, GR, HR, HU,
IE, IS, ΓΓ , LT, LU,
NL,
NO,
RO,
(BF,
BJ, CF, CG,
PL,
PT,
RS,
CI, CM,
SE, SI, SK,
GA,
GN,
EE, ES, FI, FR,
LV,
GQ,
MC,
SM,
GW,
MK,
MT,
TR),
OAPI
ML,
MR,
NE, SN, TD, TG).
規則
4.17
に規 定 す る 申立 て ：
不 利 に な らな い 開 示 又 は 新 規 性 喪 失 の 例 外 に 関
す る 申立 て （
規 則 4 . 17(v))
一
[続 葉 有 ]
(54) Title:
(54)
発 明 の 名 称 ：ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質
[ 図 3]
5
17.
5
15.
Q
12.
5-
HIV-1 JR-FL
I V-1 NL4-3
X4
175
10 . 0 7.
5
5.
0
2.
5
0
0. 0
Contro l
(57) Abstract:
[Problem]
us, whilst
also providing
X 4 virus
but also against
hibitory
substance
monoclonal
CXCR4,
antibody
5
A
T o provide
a substance
a substance
for inhibiting
R 5 virus,
which
inhibits
having
and the monoclonal
A120
for blocking
the infection
binding
antibody
specincity
which
CXCR4
infection
and thus effectively
for an
b y human
stopping
o f a target
functioning
cell b y human
receptor
substance
A
5
A
20
A80
a s a coreceptor
immunodeficiency
the onset o f human
-chemokine
i s an inhibitory
Control
A80
virus
and stopping
whicn
immunodeficiency
immunodeficiency
appearing
i s an anti-CXCR4
syndromes.
virus.
i n a target
infection
i s effective
This
cell. This
monoclonal
inhibitory
b y X 4 vir
not just
[Solution]
against
A n in
substance
-chemokine
receptor
is a
is
antibody.
要 約 ： 【課 題 】 補 助 受 容 体 と して 機 能 す る CXCR4 を ブ ロ ッ ク して X 4 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る 物 質 を
提 供 す る と と も に 、 X 4 ウ ィ ル ス の み な らず R 5 ウ ィ ル ス に も 有 効 な ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 を
提 供 し、 ヒ ト免 疫 不 全 症 候 群 の 発 症 を 有 効 に 阻 止 す る こ と に あ る 。 【
解 決 手 段 】 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の
標 的細 胞 へ の感 染 を阻害 す る阻 害 物 質 に 関 す る。
この 阻 害 物 質 は 、 標 的 細 胞 に 発 現 す る α- ケ モ カ イ ン 受
容 体 に 対 して 結 合 特 異 性 を 有 す る モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 で あ る 。
この α - ケ モ カ イ ン 受 容 体 は CXCR4 で あ
リ、 阻 害 物 質 で あ る モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 抗 CXCR4 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 で あ る 。
(57)
添付 公 開書 類 ：
-
国際調 査 報 告
（
条 約 第 2 1 条 (3))
明
細
書
発 明 の 名 称 ： ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質
技術分野
[0001 ]
本 発 明 は 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 に 関 し、 特 に 、 ヒ ト免 疫 不
全 ウ ィ ル ス の 感 染 増 殖 を 阻 害 す る こ と に よ りA I DS 発 症 を 防 止 す る こ とが 可 能
な ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 に 関 す る も の で あ る 。
背景技術
[0002]
ヒ 卜に 感 染 す る ウ ィ ル ス に よ っ て 様 々 な 感 染 症 が 引 き起 こ され る こ と は 従
来 よ り知 られ て お り、 この 感 染 症 の 撲 滅 は 世 界 平 和 を 実 現 す る た め の 世 界 共
通課題 の一 つで ある。
この よ うな ウ ィ ル ス 感 染 症 の 一 種 で あ る 後 天 性 免 疫 不 全 症 候 群 （エ イ ズ ；A
I DS) は 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス （以 下 、 「HIVウ ィ ル ス 」 と記 す ） の 感 染 に
よ る もの で あ る 。
これ は 、 ヘ ル パ ー T 細 胞 が 破 壊 され た 結 果 、 免 疫 能 力 が 極 端 に 低 下 す る こ
と に よ り、 他 の 病 原 体 に 日和 見 感 染 す る こ とが 原 因 で 罹 患 す る疾 病 で あ る 。
な お 、 HIVに は 、 ウ ィ ル ス の 起 源 に よ りHI V-1 と HIV-2 の 2 つ の タ イ プ が 存 在
す る。
[0003]
HI V-1 ウ ィ ル ス が 増 殖 す る と と も に 細 胞 死 を 誘 導 す る細 胞 が 、 主 と して GD4
陽 性 の T リンパ 球 や マ ク ロ フ ァー ジ で あ る こ とか ら、 この HI V-1 ウ ィ ル ス の 主
要 な 受 容 体 が GD4 分 子 で あ る こ と は 、 従 来 よ り知 られ て い る 。
これ は 、 GD4 分 子 の 対 す る モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 が 感 染 を 阻 害 す る こ とや 、 GD
4 を発 現 して い な い ヒ ト上 皮 系 細 胞 に GD4 を発 現 させ る こ と に よ り感 染 が 成 立
す る こ と な どか ら検 証 され て い る 。
し力、し、 GD4 を 強 制 発 現 させ て も 、 完 全 に 感 染 が 成 立 す る わ け で は な い こ と
か ら、 GD4 は 主 要 な 受 容 体 で は あ っ て も 、 これ の み で は 完 全 に 感 染 が 起 こ る わ
け で は な く、 何 らか の 要 因 が 必 要 で あ る こ とが わ か っ て い た 。
[0004]
この よ うな 状 況 下 、 HI V-1 ウ ィ ル ス の 感 染 に お い て は 、 受 容 体 と して の GD4
必 要 で あ る と と も に 、 補 助 受 容 体 と して 、 GXGR4 と GGR5 が 関 与 して い る こ とが
わ か った 。
GXGR4 及 び GGR5 は 、 白血 球 遊 走 活 性 を 有 す る た ん ぱ く質 で あ る ケ モ カ イ ン （
chemok i ne) の 受 容 体 で あ る 。
この ケ モ カ イ ン 受 容 体 は 、 G タ ンパ ク 質 共 役 型 受 容 体 （
GPGR) で あ り、 一
般 的 に は 、 ホ モ ォ リゴ マ 一 若 し くは へ テ ロオ リゴ マ ー と して 細 胞 表 面 に 存 在
す る。
[0005]
HI V-1 ウ ィ ル ス は 、 自 己 の エ ン ベ ロー プ ス パ イ ク で あ る gp1 20 を 、 感 染 標 的
細 胞 表 面 の 受 容 体 GD4 に 結 合 させ る こ と に よ り感 染 標 的 細 胞 表 面 に 連 結 す る 。
次 い で 、 gp1 20 の 立 体 構 造 を 変 化 させ る こ と に よ り、 gp1 20 を補 助 受 容 体 （
G
XGR4 又 は
及 び GGR5) に 結 合 させ る 。
そ して 、 この 状 態 で 、 gp41 の N 末 端 に 存 在 す る フ ユ 一 ジ ョン ペ プ チ ドを細
胞 の 脂 質 二 重 膜 に 突 き刺 す 。
次 い で 、 gp41 の 2 個 の ひ一 ヘ リ ッ ク ス 構 造 が お 互 い に 反 応 す る こ と に よ り
、 ヘ ア ピ ン構 造 が と られ 、 HI V-1 ウ ィ ル ス は 細 胞 表 面 に 近 接 して い く。
最 終 的 に は 、 膜 融 合 が 起 こ り、 HI V-1 ウ ィ ル ス は 自身 の ゲ ノ ム を細 胞 内 に 侵
入 させ て 感 染 が 実 行 され る 。
[0006]
— 方 、 HI V-1 ウ ィ ル ス に は 、 GD4 陽 性 の 抹 消 血 リンパ 球 と マ ク ロ フ ァー ジ で
増 殖 可 能 な ウ ィ ル ス （マ ク ロ フ ァー ジ 指 向 性 HI V-1 ウ ィ ル ス ） と 、 GD4 陽 性 の
T リンパ 球 と T細 胞 株 で 増 殖 可 能 な ウ ィ ル ス （
T細 胞 株 指 向 性 HI V-1 ウ ィ ル ス ）
とが 存 在 して い る 。
そ して 、 マ ク ロ フ ァー ジ 指 向 性 HI V-1 ウ ィ ル ス は 、 GGR5 分 子 を補 助 受 容 体 と
して 必 要 とす る こ とが 検 証 され て い る と と も に 、 T細 胞 株 指 向 性 HI V-1 ウ ィ ル
ス は 、 GXGR4 を補 助 受 容 体 と して 必 要 とす る こ とが 検 証 され て い る 。
な お 、 この よ うな 補 助 受 容 体 の 利 用 能 力 に よ り、 HI V-1 ウ ィ ル ス を 分 類 す る
こ と も あ り、 補 助 受 容 体 と して GGR5 を 利 用 す る HI V-1 ウ イ ル ス は R5 ウ ィ ル ス と
命 名 され て お り、 補 助 受 容 体 と して GXGR4 を 利 用 す る HI V-1 ウ ィ ル ス は X4 ウ イ
ル ス と命 名 され て い る 。
ま た 、補 助 受 容 体 と して GGR5 及 び GXGR4 の 双 方 を利 用 す る もの は 、 R5X4 ウ イ
ル ス と命 名 され て い る 。
[0007]
この よ うに 、 H I V-1 ウ ィ ル ス は 、 感 染 の た め に補 助 受 容 体 を使 用 す るの で あ
るか ら、 これ らの 補 助 受 容 体 に H I V-1 ウ ィ ル ス が 結 合 す る前 に 、補 助 受 容 体 を
ブ ロ ックす る こ とに よ り、 H I V-1 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 害 す る こ とが で き る こ と
が 示 唆 され る 。
実 際 、 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 は 、 GGR5 の 正 常 リガ ン ドの ケ モ カ イ ンで あ る MI P-1
ひ 、 MI P_1
、RANTES 等 で 阻 害 され 、 X4 ウ ィ ル ス の 感 染 は 、 GXGR4 の 正 常 リガ
ン ドの ケ モ カ イ ンで あ る SDF-1 ひ で 阻 害 され る 。
以 上 の 知 見 に よ り、 GGR5 及 び
又 は GXGR4 へ の H I V-1 ウ ィ ル ス の 結 合 を 阻 害
して 、 H I V-1 ウ ィ ル ス 感 染 を 阻 害 す る技 術 が 開発 され て い る （
例 えば、特 許 文
献 1 及 び特 許 文献 2 参 照 ） 。
先行技 術 文献
特許 文献
[0008]
特 許 文 献 1 ：特 開 2 0 0 6 _ 1 8 8 4 4 5 号 公 報
特 許 文 献 2 ：特 表 2 0 0 6 — 5 0 3 8 4 9 号 公 報
発 明 の概 要
発 明 が 解 決 しょ う とす る課 題
[0009]
この よ うな 知 見 の 元 、 多剤 併 用 療 法 に 変 わ る新 た な 治 療 薬 と して 、 ケ モ カ
イ ン受 容 体 阻 害 剤 が 開発 され て い る 。
例 え ば 、 GGR5 阻 害 剤 と して は 、 「
Marav i roc 」 や 「
V i c r i v i roc 」 が例 示 され
る。
し力、し、 GXGR4 阻 害 剤 と して 開発 され た 「
AMD31 00 」 は 、 一 部 の 患 者 に 重 篤
な 副 作 用 が 認 め られ た こ とか らH I V-1 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 剤 と して の 臨 床 は打 ち
切 られ て い る （
他 の 疾 病 用 の 薬 剤 と して は使 用 され て い る） 。
[001 0 ]
この よ うな 状 況 下 、 感 染 に補 助 受 容 体 と して GXGR4 を利 用 す るX4 ウ ィ ル ス に
対 して 有 効 に感 染 を 阻 止 す る物 質 の 開発 が 早 急 に 望 まれ て お り、 ま た 、 更 に
、 GGR5 及 び GXGR4 双 方 へ の 結 合 を 阻 害 す る こ とが 可 能 で あ り、 感 染 に 補 助 受 容
体 と して GGR5 を 利 用 す る R5 ウ ィ ル ス に も併 せ て 効 果 を 有 す る 物 質 の 開 発 が 望
まれ て いた 。
[001
この よ うな 状 況 下 、 発 明 者 らは 鋭 意 研 究 を 重 ね 、 あ る種 の GXG ケ モ カ イ ン 受
容体抗体 を
（ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 抗 体 ）を 用 い る こ と に よ っ て 、 X4 ウ ィ ル ス の
感 染 の み な らず 、 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 も ま た 阻 害 す る こ とが 可 能 で あ る と い う
知 見 を得 た 。
つ ま り、 GXG ケ モ カ イ ン 受 容 体 抗 体 で あ る Ant i _GXGR4 ECL 3抗 体 （以 下 、 単
に 「
A80 抗 体 」 と記 載 ） 、 Ant i -CXCR4 ECL 2抗 体 で あ る MAB1 7 1 抗 体 ， MAB1 72 抗
体 ， MAB1 73 抗 体 が 、 GXGR4 を ブ ロ ッ ク して X4 ウ ィ ル ス の 結 合 を 阻 害 す る だ け で
は な く、 これ らの 抗 体 が R5 ウ ィ ル ス の 感 染 も ま た 阻 害 す る と い う知 見 を 得 た
もの で あ る 。
ま た 、 特 に 、 GXG ケ モ カ イ ン 受 容 体 抗 体 で あ る Ant i _GXGR4 ECL 1&2 抗 体 （以
下 、単 に 「
A 1 20 抗 体 」 と記 載 ） が 、 GXGR4 を ブ ロ ッ ク して X4 ウ ィ ル ス の 結 合 を
顕 著 に 阻 害 す る だ け で は な く、 この A 1 20 抗 体 が R5 ウ ィ ル ス の 感 染 も ま た 顕 著
に 阻 害 す る と い う知 見 を 同 時 に 得 た も の で あ る 。
[001 2]
本 発 明 の 目的 は 、 上 記 課 題 に 鑑 み 、 補 助 受 容 体 と して 機 能 す る GXGR4 を プ ロ
ッ ク して X4 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る 物 質 を提 供 す る と と も に 、 X4 ウ ィ ル ス
の み な らず R5 ウ ィ ル ス に も有 効 な ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 を提 供
し、 ヒ ト免 疫 不 全 症 候 群 の 発 症 を 有 効 に 阻 止 す る こ と に あ る 。
課 題 を解 決 す るた めの 手 段
[001 3]
上 記 課 題 は 、 本 発 明 に よれ ば 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の 標 的 細 胞 へ の 感 染
を 阻 害 す る 阻 害 物 質 を提 供 す る こ と に よ り解 決 され る 。
この 阻 害 物 質 は 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 に 対 して 結
合 特 異 性 を 有 す る モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 で あ る 。
また 、前 記
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ り、 前 記 阻 害 物 質 で あ る前 記
モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 で あ る 。
な お 、 この
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 は 、
ひ
- ケモカイ ン （
GXG ケ モ カ イ ン
) で あ るSDF- 1 ひ /
[001 4]
、 卜TAG の 受 容 体 で あ る 。
更 に 、 前 記 阻 害 物 質 は 、 前 記 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の う ち 、 前 記 標 的 細 胞
に 発 現 す る ; - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 R5 ゥ
ィ ル ス 、前 記 標 的細 胞 に発 現 す る
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 を補 助 受 容 体 と
して 利 用 す る HI V-1 X4 ウ ィ ル ス 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る
体 GGR5 及 び
ひ
- ケ モ カ イ ン受容
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 の 双 方 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V
- 1 R5X4 ウ ィ ル ス 、 全 て の 感 染 を 阻 害 す る 。
[001 5]
そ して 、 前 記
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ る と と も に 、 前 記 阻 害 物 質
で あ る前 記 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 で あ り、 前 記 抗
GXGR4 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 前 記 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ 突 出 して い る前 記
GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 少 な く と も第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第
2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 、 若 し く
は 、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る 。
な お 、 少 な く と も第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有
す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 と は 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン 又 は 第 2 ル
ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 認 識 す る 抗 体 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及 び 第 2 ル ー プ ド
メ ィ ン双 方 を 認 識 す る 抗 体 を 含 み 、 この GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン う ち 、
第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン双 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ
を認 識 す る抗 体 が 、 本 明細 書 中 の 「
A 1 20抗 体 」 （
Ant i -GXGR4 ECL 1&2 抗 体 ）
若 し くは 12G5 抗 体 で あ り、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を
認 識 す る抗 体 が 、 本 明細 書 中 の 「
A80 抗 体 」 （
Ant i -GXGR4 ECL 3抗 体 ） で あ る
ま た 、 第 2 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 は 、 M
AB1 7 1 抗 体 ， MAB1 72 抗 体 ， MAB1 73 抗 体 で あ る 。
[001 6]
また 、前 記
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ る と と も に 、 前 記 阻 害 物 質 で
あ る前 記 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 で あ り、 前 記 抗 GX
GR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 前 記 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ 突 出 して い る前 記 GX
GR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 少 な く と も第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及 び 第 2
ル ー プ ドメ ィ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ り、 前
記 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 は 、 前 記 GXGR4 に 結 合 す る こ と に よ り、 前 記 標
的 細 胞 に 発 現 す る ひ- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HIV
-
X4 ウ ィ ル ス の 前 記 GXGR4 へ の 結 合 を 阻 害 す る こ と に よ り、 前 記 HI V-1 X4 ゥ
ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る と と も に 、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 前 記 GX
GR4 へ の 結 合 に よ り誘 起 され る
る
- ケ モ カ イ ン に よ り、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 を ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン させ 、 結 果 と して この
GGR5 を補 助
受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る 。
な お 、 前 述 の と お り、 少 な く と も第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ
イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 と は 、 第 1 ル ー プ ドメ
イ ン 又 は 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 認 識 す る 抗 体 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及
び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン双 方 を 認 識 す る 抗 体 を 含 む 。
つ ま り、 A 1 20 抗 体 を 筆 頭 に 、 前 段 落 に例 示 した 各 抗 体 は 、 HI V-1 X4 ウ ィ ル
ス 及 び HI V-1 R5 ウ ィ ル ス 双 方 の 感 染 を 有 効 に 阻 止 す る 。
発 明の効 果
本 発 明 に 係 る ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 は 、 HI V-1 ウ ィ ル ス の 補 助
受 容 体 で あ る GXGR 4 を ブ ロ ッ ク す る こ と に よ り、 X4 ウ ィ ル ス の 感 染 を 有 効 に
阻止 で きる。
ま た 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 の 中 で も 、 標 的 細 胞 表 面 よ り外
側 へ 突 出 して い る GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン
及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る A 1 2
0抗 体 は 、 GXGR4 に 結 合 す る こ と に よ りダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン を 誘 起 して 、 R
5 ウ ィ ル ス の 感 染 も 同 時 に 阻 止 す る こ とが で き る 。
この よ う に 、 本 発 明 に 係 る ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 は 、 X4 ウ イ
ル ス の み な らず 、 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 も 同 時 に 阻 止 す る こ とが で き る 。
よ っ て 、 特 に 、 X4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ウ ィ ル ス の 感 染 に よ る ヒ ト免 疫 不 全 症 候
群 の 発 症 を 有 効 に 防 止 す る こ とが 可 能 と な る 。
図面 の簡 単 な説 明
[ 図 1]X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に つ い て の 模 式 図 で あ る 。
[ 図 2]
PBMG
( 抹 消 血 単 核 球 ） の 活 性 化 と HI V-1 の 感 染 ス キ ー ム を 示 す 流 れ 図 で
[ 図 3] 活 性 化 PBMG ( — 次 ） へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び Χ4 ウ ィ ル ス の 感 染 に 対 す る 抗 G
XGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 効 果 を 示 す グ ラ フ で あ る 。
[ 図 4] Α120 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の Χ4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ウ ィ ル ス 感 染 抑 制 効 果 を
示 す グ ラ フで あ る。
[ 図 5] 関 連 性 の な い複 数 の ドナ 一 由 来 の 活 性 化 PBMG に 対 す る Α120 モ ノ ク 口 一 ナ
ル 抗 体 の HI V-1 生 成 抑 制 効 果 を 示 す グ ラ フ で あ る 。
[ 図 6] 活 性 化 PBMG で の R5 ウ ィ ル ス 及 び Χ4 ウ ィ ル ス 抑 制 効 果 に お け る Α120 モ ノ ク
口ー ナ ル 抗 体 の 濃 度 依 存 性 を 示 す グ ラ フ で あ る 。
[ 図 7] HI V-1 産 生 細 胞 株 及 び HTLV-1 産 生 細 胞 株 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗
体 の 影 響 を示 す グ ラ フで あ る。
[ 図 8] 活 性 化 PBMG に お け る A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 に よ る GGR 5 結 合 性
- ケ
モ カ イ ン産 生 の 増 加 を 示 す グ ラ フ で あ る 。
[ 図 9] A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性
— ケ モ カ イ ン産 生 の
誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン を 示 す グ ラ フ で あ る 。
[ 図 10] A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性
— ケ モ カ イ ン産 生 の
誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン を 示 す ヒス トグ ラ ム で あ る 。
[ 図 11] A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性
— ケ モ カ イ ン産 生 の
誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン を 示 す ヒス トグ ラ ム で あ る 。
[ 図 12] T 細 胞 と単 核 球 に お け る A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 刺 激 に よ る ; - ケ モ
力 イ ン産 生 を 示 す グ ラ フ で あ る 。
[ 図 13] 様 々 な HIV-
株 種 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 感 染 抑 制 効 果 を
示 す グ ラ フで あ る。
[ 図 14] 活 性 化 PBMG ( — 次 ） へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に 対 す る 抗
GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 効 果 を 示 す グ ラ フ で あ る 。
[ 図 15] 活 性 化 PBMG に お け る A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 及 び MAB1 73 モ ノ ク 口_ ナ
ル 抗 体 に よ る GGR 5 結 合 性
— ケ モ カ イ ン産 生 の 増 加 を 示 す グ ラ フ で あ る 。
[ 図 16]A1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の X4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 メ カ 二
ズ ム を示 す 模 式 図 で あ る。
発 明 を実施 す るた めの 形 態
[001 9]
以下 、本発 明の一実施 形態 につ いて説 明す る。
な お 、 以 下 に 説 明 す る 部 材 、 配 置 等 は 、 本 発 明 を 限 定 す る も の で は な く、
本 発 明 の 趣 旨 に 沿 っ て 各 種 改 変 す る こ とが で き る こ と は 勿 論 で あ る 。
[0020]
以 下 に 、実 験 系 及 び結 果 に つ いて説 明す る。
図 1 に 、 X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に つ い て の 模 式 図 を 示 す 。
上 述 した よ う に 、 X4 ウ ィ ル ス が 細 胞 に 感 染 す る 際 に は 、 そ の エ ン ベ ロー プ
ス パ イ ク で あ る gp1 20 を細 胞 表 面 の 受 容 体 GD4 に 結 合 させ る こ とが 必 要 で あ る
と と も に 、 そ の gp1 20 の 立 体 構 造 を 変 化 させ る こ と に よ り、 gp1 20 を補 助 受 容
体 で あ る GXGR4 に 結 合 させ る こ とが 必 要 で あ る 。
補 助 受 容 体 と して 作 用 す る GXGR4 は 、 ケ モ カ イ ン 受 容 体 で あ る が 、 この GXGR
4 は 、 細 胞 表 面 に 、 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン を 突 出 させ た 状 態 で 存 在 す る こ とが
知 られ て い る 。
[0021 ]
発 明 者 らは 、 この 中 で 、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を
認 識 す る 抗 体 で あ る A80 ( ク ロー ン ） 、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ
ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る MAB1 7 1 , MAB1 72,
MAB1
73 が 特 異 的 性 質 を 有 す る
こ と を 見 出 し、 これ らの モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 と GXGR4 との 連 結 体 が 、 X4 ウ ィ ル
ス の 活 性 化 PBMG ( 末 梢 血 単 核 球 ） へ の 感 染 を 阻 害 す る の み で は な く、 R5 ウ イ
ル ス の 活 性 化 PBMG へ の 感 染 を も ま た 阻 害 す る こ と を確 認 した （i n v i tro)
。
ま た 、 この 中 で 特 に 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す
る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る A 1 20 ( ク ロー ン ） が 特 異 的 性 質 を
顕 著 に 有 す る こ と を 見 出 し、 この A 1 20 と GXGR4 との 連 結 体 が 、 X4 ウ ィ ル ス の 活
性 化 PBMG ( 末 梢 血 単 核 球 ） へ の 感 染 を 阻 害 す る の み で は な く、 R5 ウ ィ ル ス の
活 性 化 PBMG へ の 感 染 を も ま た 大 き く阻 害 す る こ と を確 認 した （i n v i tro)
以 下 、 そ の検 証 を示 す 。
。
[0022]
.
(
使用試薬及 び方法等
)
培地
1 640 培 地 は 1
RPM I
阳 3 - 六 1 づ1
ペ ニ シ リ ン 、 1 0 0 〃 g/ml
00U/ml
単 に
「RPM I
p e Cu l ture
( 2 )
ス ト レ プ トマ イ シ ン を 加 え て 調 整 し た
（以 下 、
培 地 」 と記 す ） 。
抗 ヒ hCD3 ( c l one
[0023]
北 . I nc. St. Lou i s , M0) に 、 1 0 % ゥ シ 胎 児 血 清 （FGS) 1
及 び 抗 GD28 ( c l one
0KT-3)
Go I l ect
i o n (Rockv
i I le,
1 10
28. 2 ) は 、 そ れ ぞ れ Amer i can
)及 び
0 1_ 6
は310
61
16
0 ,
Ty
GA) の も の で
抗体等
抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の ク ロ ー ン は 、 当 研 究 室 の WKA ラ ッ トを 免 疫 し
て 作 成 した 。
A 14 5 ク ロ ー ン
、 A 1 2 0 ク ロ ー ン （l gG2b)
（l gG1 )
、 A80 ク ロ ー ン （l gG1 )
も
同様 で あ る。
これ らの 構 造 及 び 作 成 方 法 の 詳 細 は 、 文 献 1
recogn
ag
ted
i z i n g the
l u t i nat
syncyt
2001
i o n and
enhances
i u m format
; 7 5 (23)
I . 75. 23.
t h i r d extrace
1 534-1
human
i o n and
: 1 1 534-1
543.
543
l lu lar
2001 , Tanaka
l oop
of
i mmunodef
product
Prepub
「Un i q e
i
e
l i shed
CXCR4
i c i ency
i nfect
i onj
o n 2001/1
R , Yosh
monoc
l ona l
i nduces
1/02
as
i d a A , Murakami
i body
l ymphocyte
v i rus
Journa
ant
type
l
of
DO I
T , et
1-med
ia
v i r o l ogy
0.
1 28/
V
a に参 照 の こ
と。
ま た 、 こ れ ら の モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 に よ っ て 認 識 さ れ る ェ ピ トー プ の 解 析
も、上 記 文 献 1 参 照 の こ と。
な お 、 1 2 G 5 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 、 MAB1 7 1 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 、 MAB1 7 2 モ ノ
ク ロ 一 ナ ル 抗 体 、 MAB1 7 3 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 R&D よ り購 入 し た 。
[0024]
使 用 した ラ ッ
(LAT-27
g G ア イ ソ タ イ プ コ ン ト ロ ー ル は 、 l gG2b
ク ロ ー ン ）と l gG1
ant
i -HCV
こ れ に つ しゝて の 詳 細 は 、 文 献 2
ecomb i nant
second
enve
l ope
prote
enve
l ope2
「New monoc
i n of
ant
i _HTLV_1
gp46
(Mo- 8 ク ロ ー ン ）で あ る 。
l ona l
Hepat
ant
i bod i e s aga i nst
i t i s C v i rusj
M i crob
io l
a
r
I
muno l 1988 ; 4 2 ( 1 2 ) : 875-877.
, Kato
N , Tanaka
Prepub
l i shed
on
999/02/26
a s DO I , I nudoh
M
Y参 照 の こ と 。
ラ ッ ト抗 ヒ トC C R 5 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 T31 2 rat
l gG1 ク ロー ン 由 来
の も の で あ り、 詳 細 は 、 上 記 文 献 1 参 照 の こ と 。
[0025]
これ らの モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 GB. 17-SGI Dマ ウ ス 腹 水 の 硫 酸 ア ン モ ニ ゥ
ム 沈 殿 、 Superdex
G200 (GE) で の ゲ ル ろ過 を 行 う こ と に よ り精 製 した 。
これ らの 抗 体 の 調 整 は 、 p o l ymi x i n B c o l umn を 通 す こ と に よ り行 い 、 リポ
多 糖 (LPS) の 混 入 は 、 LAL 法 に よ り確 認 し、 リポ 多 糖 (LPS) の 濃 度 は 検 出 下 限 界
外 で あ る こ と が 確 認 され た 。
[0026]
I g Gの 一 部 は 、 既 存 の 標 識 キ ッ トを 取 扱 説 明 書 に 沿 っ て 使 用 し、 A l exa
r 488
、 A l exa F l uor
647 ( l n i trogen)
Gy5 (GE) 、 horserad
よ っ て 標 識 した (Doj i n , Kumamoto, Japan)
i shperox
F l uo
i daselz
。
F I TC ( フ ル ォ ロセ イ ン イ ソ チ ア ネ ー ト） 標 識 若 し くは PE ( フ ィ コ エ リ トリ
ン ） 標 識 抗 ヒ トGD4 、 GD8 、 GD1 4 、 GD1 9 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 Beckman-GoiH
t
e r 若 し くは B i oLegend よ り購 入 した 。
[0027]
使 用 した 抗 H I V-1
羊細 は 、 文 献 3
0X40
P24 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 発 明 者 の 研 究 室 で 作 成 した 。
「Suppress i o n o f CCR5-trop
s t i mu l a t i o n v i a enhanced
earch
0/09/22
and
human
retrov
a s DO I
0.
i ruses
089/a
a i t o M , Ansar i AA, Tanaka
[0028]
product
i c H I V type
i on of
beta_chemok
1 i nfect
i nes 」 A I DS res
201 0 2 6 ( 1 0 ) : 1 147-1 15 4 Prepub
i d . 201 0 . 0043, Tanaka
R , Takahash
i on by
l i shed
on 20
i Y , Kodama A , S
Y参 照 の こ と 。
抗 ヒ トGD4 、 GD8 、 GD1 4 、 GD1 9 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 抱 合 した マ グ ネ ッ トビ
ー ズ は 、 Dyna l and よ り購 入 し、 取 扱 説 明 書 に 沿 っ て 使 用 した 。
12G5 を 含 有 す る 低 ェ ン ド トキ シ ン マ ウ ス 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 は 、 B i
oLegend
[0029]
and
R&D よ
り購 入 した 。
( 3 ) H I V調 整
H I V-1 (JR_FL) 、 H I V-1 (JR_GSF) 、 H I V-1 (NL4-3)
は 、 リン酸 カ ル シ ウ ム 法 に よ
り、 H I V-1 感 染 性 プ ラ ス ミ ドD N A を 有 す る 293T 細 胞 の トラ ン ス フ エ ク シ ヨ ン
に よ り作 成 した 。
詳細 は、文献 4
「I nduct
human
i mmunodef
mi c e by
i ntrasp
oss i b l e
i nvo l vement
rna l o f
i c i ency
l en i c
i o l ogy
v i rus
protect
type
i e
i mmune
1 ( H I V-1 )
responses
i nfect
i on
i mmun i zat i o n w i t h H I V-1 -pu l sed
of
nove l factor
human
CD4 (+) T-ce
2003 ; 7 7 ( 1 6 ) : 871 9- 8728
Prepub
l i shed
R , Murakami
T et
aga i nst
R5
i n hu-PBL-SCI
dendr
of
D0 I , Yosh i d a A , Tanaka
[0030]
i on of
D
it ic ce l l s :p
11 o r i g i nj
o n 2003/07/30
Jou
as
a に参 照 の こ と 。
遺 伝 子 導 入 細 胞 は 、 RPM は音地 に て 4 日 間 培 養 した
（i n v i tro)
。上清 を回
収 し、 ウ ィ ル ス 力 価 を 決 定 した 。 詳 細 は 、 上 記 文 献 4 参 照 。
HIV-
1 ( 1
B)
は 、 Mo l t-4/
111 c e l l
l i n e で 作 成 し、 培 養 上 清 は 回 収 して
使 用 した 。
そ の 他 の H I V- 1 は 、 H I V subtype
cs, West
Br i dgewater,
( 4 )
PBMC
i
i t y pane l PRD320 (BB I D i agnost
i
MA, USA) か ら得 た も の で あ る 。
H I V-1 は 、 使 用 す る ま で 、 _80
[0031 ]
i nfect
°C で 保 存 した 。
( 末 梢 血 単 核 球 ) の 活 性 化 と H I V-1 の 感 染
健 康 な ドナ ー か ら採 取 さ れ た PBMG ( 末 梢 血 単 核 球 ） を 活 性 化 した 。 詳 細 は
、上 記 文 献 3 参 照 の こ と。
簡単 なスキー ム を図 2 に示す 。
[0032]
以下 、簡 略 に説 明す る。
密度勾配遠心
RPM
( H i stoPAQUE-1
は音地 に 懸 濁 さ せ
077 ：
S i gma-A I d
（
濃 度 ：2 x 10 6c e l I s/ml )
レ コ ー ト した 1ml /we l I の プ レー ト （24we l に BD)
、 0KT3
( 濃 度 ：5
g/ml
)
でプ
に 分 注 して 、 0 . 1 パ g/ml の 抗 G
D28 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 存 在 下 2 4 時 間 培 養 した
[0033]
に よ っ て 得 られ た PBMG を
i ch)
（5 % 炭 酸 ガ ス 雰 囲 気 下 ）
活 性 化 PBMG を 回 収 して 一 度 洗 浄 し、 H I V-1 ク ロ ー ン （
感 染 多 重 度 0 . 005 〜0. 0
1m. 0 . i . )
又 は一次分離物
（
細 胞 数 2 x 10 6 に 対 して p24 が 10ng)
を 感 染 させ た
2時間 ） 。
次 い で 三 回 洗 浄 し、 20Uml
I L-2 を 含 有 す る RPM は音地 に 再 度 懸 濁 さ せ
（
濃度
（
： x 1 0 c e l I s/ml
)
l I の プ レ ー ト (48we
、 0 . 5ml /we
l に BD)
に 分 注 して 、 様 々
な 濃 度 の 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 存 在 又 は 非 存 在 下 及 び コ ン ト ロ ー ル を
培 養 した 。
選 択 実 験 と し て は 、 抗 GD3/GD28
[0034]
ml
I L-2
抗体
（1
を 感 作 し た 活 性 化 PBMG を 、 20U
day)
を 含 有 す る RPM は音地 に て 、 A 1 2 0 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 存 在 下 又 は 非 存
在 下 、 24 時 間 培 養 し
（濃 度 ：1 x 1 0 6 c e l I s/ml
)
、
；
- ケ モ カ イ ン の 量 を E L I SA に
よ り定 量 した 。
H I V-1 の 増 殖 は 、 培 養 液 上 清 中 に 生 成 さ れ た H I V-1
core
4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 と の 結 合 を 利 用 した キ ヤ プ チ ャ
p24 を 、 抗 H I V - 1 P2
一EL I SA に よ り 定 量 こ と
に よ り 同 定 し た 。 な お 、 ス タ ン ダ ー ド と し て 組 換 え 型 H I V-1
ademi
- ケ モ カ イ ン に 適 用 す る E L I SA キ ッ トは 、 B i osource
く は B i o l egend
[0035]
( 5 )
（B
i o Ac
¾：使 用 し 二。
a , Canada)
ヒ ト
P24 蛋 白
(Gamer
i I l o) 若 し
よ り購 入 し た 。
フ ロ ー サ イ トメ ト リ 一
（F
：以 下 、 単 に
l o w Cytometry
「FGM 」
と記 す ）
生 細 胞 の FGM 分 析 に つ い て の 詳 細 は 、 上 記 文 献 3 参 照 の こ と 。
以下 、簡 略 に説 明す る。
分 析 を 行 う 細 胞 は 、 2mg/ml
の ヒ
g Gで F c 受 容 体 を ブ ロ ッ ク し
（氷 冷 1 5 分 ）
、 これ ら の 細 胞 の 一 定 量 を 、 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 と 結 合 した 蛍 光 染 料
決 定 した 濃 度 ） で 染 色 した
細 胞 は 、 FAGS 緩 衝 液
（氷 冷 3 0 分 ） 。
（2%FGS と 0 . 1 % ア ジ 化 ナ ト リ ウ ム を 含 む PBS)
て 、 FAGS 緩 衝 液 中 の 1 % パ ラ ホ ル ム ア ル デ ヒ ド （以 下 、 単 に
で 固 定 し 、 FAGS
[0036]
（予 め
で洗 浄 し
「PFA 」 と 記 す ）
を 使 用 して 分 析 した 。
Ga l i bur
得 た 分 析 デ ー タ は 、 Ce l l Quest
softwear
(BD)
で 解 析 した 。
H I V-1 感 染 細 胞 を 検 出 す る た め に 、 細 胞 を 4 %の PFA を 含 む PBS で 固 定 し
（室 温
5 分 ） 、 0 . 1 %の サ ポ ニ ン を 含 む FAGS 緩 衝 液 で 洗 浄 し た 。
こ れ ら の 細 胞 は 、 2mg/ml
の ヒ
こ れ ら の 細 胞 の 一 定 量 を 、 抗 H I V-1
と 結 合 し た A l exa
F l uor
g Gで F c 受 容 体 を ブ ロ ッ ク し
p24 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体
488 で 染 色 し た
（氷 冷 3 0 分 ） 。
（氷 冷 1 5 分 ） 、
（ク ロ ー ン 2G2)
細 胞 は 、 FAGS 緩 衝 液 で 洗 浄 し、 p24+ 細 胞 の 細 胞 頻 度 分 布 と絶 対 数 を 、 細 胞
計測キ ッ ト （
BD) を使 用 して FGM に よ りマ ニ ュ ア ル に 沿 っ て 計 測 した 。
[0037]
( 6 ) 統計解析
デ ー タ は 、 Pr i s m software (Graph Pad) を使 用 し、 ス チ ュ 一 デ ン トt 検 定 に
よ り有 意 差 の 有 無 を解 析 した 。
[0038]
2 . 実 験 及 び結 果
( 1 ) 活 性 化 PBMG ( — 次 ） へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に 対 す る 抗
GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 効 果
研 究 室 で 調 整 した 10
g/ml 抗 GXGR4 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 （
A 1 45 ク ロー ン 、 A 1
20 ク ロー ン A80 ク ロー ン ） の 存 在 下 及 び 非 存 在 下 に お い て 、 抗 GD3/GD28 抗 体 で
活 性 化 した PBMG ( 初 代 培 養 ） へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス （
JR-FL 株 及 び N
L4-3 株 ） の 感 染 性 を 分 析 した 。
これ らの PBMG は 、 低 感 染 多 重 度 （
0 . 005 〜 0 . 0 1 ) で HI V-1 に プ レ感 染 させ て
お り、 検 証 す る モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 存 在 下 又 は 非 存 在 下 で 培 養 を 行 った 。
[0039]
その結 果 を図 3 に示す 。
図 3 に 示 す よ う に 、 A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 及 び A80 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 は
、 R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス 双 方 の 生 成 （HI V-1 P24) を 顕 著 に 抑 制 した が
、A 1 45 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 大 き な 増 殖 抑 制 効 果 は 認 め られ な か った 。
[0040]
(2 )
A 1 20 モ
ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の 更 な る 評 価
上 記 実 験 に お い て 、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の HI V-1 抑 制 効 果 が 、 そ の 他 の
モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 中 で 最 も高 か った の で 、 A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の ゥ
ィ ル ス 感 染 抑 制 効 果 の 更 な る 評 価 を 行 った 。
HI V-1 株 と して 、 R5 HI V-1 JR- Fし
R5
HI V-1 JR- GSF 、X4 HI V-1
NL4— 3、X4
HI V-1 I I I Bを使 用 した 。
[0041 ]
その結 果 を図 4 に示す 。
図 4 に 示 す よ う に 、 R5 HI V-1 JR- Fし R5 HI V-1 JR- GSF 、X4 HI V-1 NL4- 3、
X4 HI V-1
I I I B全 て の 株 に お い て 、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 が HI V_1 生 成 抑 制
効 果 を 示 す こ とが 認 め られ た 。
[0042]
関 連 性 の な い複 数 の ドナ 一 由 来 の 活 性 化 PBMG に 対 す る A 1 2 0 モ ノ ク ロ一
( 3 )
ナ ル 抗 体 の H I V-1 生 成 抑 制 効 果
関 連 性 の な い ドナ 一 由 来 の 活 性 化 PBMG に 対 す る A 1 2 0 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の R
5 H I V-1
6
JR-FL
及 び X4 H I V-1
NL4-3
生 成 及 び 増 殖 抑 制 効 果 を検 証 した 。
例 の ドナ ー か ら採 取 した PBMG は 、 固 定 化 した 0KT-3 と溶 液 状 の 抗 GD28 モ ノ
ク ロー ナ ル 抗 体 で 予 め 活 性 化 し、 R5 H I V-1
JR-FL
及 び X4 H I V-1
NL4-3
に感 染
させ た （
感 染 多 重 度 0 . 0 1m . 0 . i ) 。
細 胞 は 洗 浄 後 、 A 1 2 0 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 及 び コ ン トロー ル （rat i sotype)
と
と も に 4 日間 培 養 した 。
ウ ィ ル ス の 増 殖 は 、 p24 濃 度 、 及 び 1 .
( 5 )
に お い て 記 載 した FGM に よ る
感 染 細 胞 の 頻 度 分 布 に よ り評 価 した 。
[0043]
その結 果 を図 5 に示す 。
図 5 に 示 す よ う に 、 R5 H I V-1
JR-FL
及 び X4 H I V-1
NL4-3
生成 及 び増 殖 抑 制
効 果 に は 確 か に ドナ 一 毎 の ば らつ き が あ る が 、 どの ケ ー ス に お い て も 、 A 1 2 0
モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 添 加 す る こ と に よ り、 顕 著 な 抑 制 効 果 を 示 す こ とが わ
か る。
更 に、図 5
( b )
に よ る と 、 どの ケ ー ス に お い て も 、 感 染 細 胞 の 頻 度 分 布
が 減 少 して い る こ とか ら、 A 1 2 0 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 感 作 させ る と 、 ウ ィ ル
ス の 細 胞 伝 播 が 抑 制 され る こ とが わ か る 。
この よ う に 、 R5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス 双 方 の 感 染 及 び 増 殖 を 抑 制 す る 抗 G
XGR4
モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体
（A1
20 モ
ノ ク ロー ナ ル 抗 体 ） は 、 現 在 知 られ て い る
限 りに お い て は 初 め て の 知 見 で あ る 。
[0044]
( 4 )
活 性 化 PBMG で の R5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス 抑 制 効 果 に お け る A 1 2 0 モ ノ
ク ロー ナ ル 抗 体 の 濃 度 依 存 性
X4
ウ ィ ル ス と比 較 して R5 ウ ィ ル ス の 抑 制 効 果 に 違 い が あ る の か 否 か を検 証
した 。
X4
ウ ィ ル ス 及 び R5 ウ ィ ル ス に 感 染 した 活 性 化 PBMG を 各 濃 度 の A 1 2 0 モ ノ ク 口
ー ナ ル 抗 体 濃 度 存 在 下 で 4 日間 培 養 した 。
培 養 上 清 に お け る HI V-1 感 染 は 、 24 EL I SA に よ り評 価 した 。
[0045]
その結 果 を図 6 に示す 。
図 6 に 示 す よ う に 、 最 大 の 抑 制 効 果 を 顕 す A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 濃 度 は
、 R5 ウ ィ ル ス で は 5 〃 g/ml 以 上 で あ り、 X4 ウ ィ ル ス で は 0 . 6 〃 g/ml 以 上 で あ つ
た。
しか し、 図 5 の グ ラ フ の 形 状 が 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 に よ る R
5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ イ ル ス 抑 制 の メ 力 二 ズ ム は 異 な る こ とが 示 唆 され た 。
[0046]
( 5 ) HI V-1 産 生 細 胞 株 及 び HTLV-1 産 生 細 胞 株 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ 一 ナ ル 抗
体 の影響
上 記 の よ うな 結 果 が 得 られ て い る が 、 A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ
る ウ ィ ル ス の 感 染 及 び 増 殖 抑 制 は 、 A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 に 混 入 して い た
非 特 異 的 な 阻 害 物 質 の 存 在 に よ り二 次 的 に 引 き起 こ され た も の で は な い 。
これ を 示 す た め に 、 同 濃 度 及 び 同 量 の A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 を HI V-1 産 生
細 胞 株 Mo は- 4/ I I I B及 び HTLV-1 産 生 細 胞 株 MT-2 に 添 加 して 検 証 した 。
HI V-1 産 生 細 胞 株 Mo 11-4/ 1I I B及 び HTLV-1 産 生 細 胞 株 MT-2 は 、 A 20 モ ノ ク ロ
— ナ ル 抗 体 （10ug/ml ) 又 は コ ン トロー ル 存 在 下 で 1 日間 培 養 した 。
培 養 上 清 に お け る HI V-1 p24 、 HTLV-1 p24 は EL I SA に よ り評 価 した 。
[0047]
その結 果 を図 7 に示す 。
図 7 に 示 す よ う に 、 A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 を 添 加 した こ と に よ る 影 響 は
認 め られ な か った 。
[0048]
( 6 ) 活 性 化 PBMG に お け る A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 に よ る GGR 5 結 合 性
—ケ
モ カ イ ン産 生 の 増 加
ヒ トMI P-1 ひ、 ヒ トMI P_1
、 ヒ トRANTES に 対 す る 中 和 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体
を使 用 し、 これ らの 中 和 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 が R5 ウ ィ ル ス の 感 染 及 び 増 殖 に
対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 効 果 を 逆 転 させ る か 否 か を検 討 した 。
6 例 の ドナ ー か ら採 取 した PBMG は 、 固 定 化 した 0KT-3 と溶 液 状 の 抗 GD28 モ ノ
ク ロー ナ ル 抗 体 で 予 め 活 性 化 し、 洗 浄 後 、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 及 び コ ン
トロー ル （
rat
i sotype) で 1 日間 感 作 した 。
培 養 上 清 に お け る ; - ケ モ カ イ ン は EL I SA に よ り評 価 した 。
[0049]
その結 果 を図 8 に示す 。
図 8 に 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 媒 介 した R5 ウ ィ ル ス 抑 制 効 果
は 、 抗 MI P-1
ひ
モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 及 び 抗 MI P-1
モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 の 添 加
に よ り逆 転 した が 、 抗 RANTES モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ っ て は 逆 転 しな
か った 。
[0050]
(7 )
A 1 20 モ
ノ ク ロー ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性
— ケ モ カ イ ン産 生 の
誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン
A 1 20 モ
ノ ク ロー ナ ル 抗 体 と GXGR4 の 結 合 に よ っ て 、 MI P-1
ES が 生 成 す る の か 否 か を確 認 す る た め 、
ひ 、
MI P_1
、 RANT
1 日A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 感 作
した 培 養 液 の 上 清 中 の ケ モ カ イ ン濃 度 を 測 定 した 。
[0051 ]
その結 果 を図 9 乃 至 図 1 1 に示す 。
図 9 に 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 存 在 下 で 培 養 した 抗 GD3/GD28
活 性 化 PBMG は 、 全 て の ドナ 一 に お い て 、 MI P-1
ひ
及 び MI P-1
の 生 成 量 を顕 著
に 増 加 させ た 。
な お 、 RANTES に お い て は 、 半 数 の ドナ ー で 増 加 が 認 め られ た 。
[0052]
ま た 、 図 1 0 に 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 が 存 在 す る 培 地 の 活 性
化 PBMG は 、 GGR5+ 細 胞 頻 度 及 び GD4+T 細 胞 の 表 面 で の GGR5 発 現 平 均 密 度 を 顕 著
に 低 下 させ る 。
逆 に 、 GD4+T 細 胞 に よ っ て 発 現 す る GXGR4 の 平 均 密 度 は 僅 か に 増 加 す る 。 な
お 、 これ は 、 同 じPBMG 培 養 に お い て A 1 45 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 （
A 1 20 モ ノ ク ロ
ー ナ ル 抗 体 と は 交 差 反 応 を起 こ さ な い ） を使 用 して 検 出 した 。
[0053]
更 に 、 図 1 1 に 示 す 通 り、 活 性 化 PBMG が A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 と と も に
ィ ンキ ュベ
一
トされ る こ と に よ り引 き起 こ され る GGR5 発 現 の 低 下 は 、 Ml P-1
モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 及 び 抗 Ml P-1
モ ノ り
ひ
ロー ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ り逆 転 す る
力、 抗 RANTES モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ っ て は 逆 転 しな い 。
以 上 の よ う に 、 これ らの 結 果 に よ り、 抗 GD3/GD28 活 性 化 PBMG を A 1 20 モ ノ ク
口一 ナ ル 抗 体 と と も に イ ン キ ュ ベ 一 卜す る こ と に よ り、 X4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ゥ
ィ ル ス 双 方 の 感 染 が 抑 制 され る こ とが わ か る 。 これ は 、 X4 ウ ィ ル ス に 対 して
は GXGR4 を ブ ロ ッ ク す る こ と に よ りも た ら され る 作 用 で あ り、 R5 ウ ィ ル ス に
対 して は MI P-1 ひ及 び MI P-1
の よ うな GGR5 結 合 性 β - ケ モ カ イ ン の 合 成 に よ る
と こ ろ で あ る と示 唆 され る 。
[0054]
(8 )
Τ 細 胞 と単 核 球 に お け る Α120 モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 の 刺 激 に よ る ; - ケ モ
力 イ ン産生
Α120 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 存 在 下 で の 活 性 化 PBMG の イ ン キ ュ ベ 一 卜に 伴 い
_
ケ モ カ イ ン の 合 成 を 行 う細 胞 を 同 定 す る た め に 、 細 胞 除 去 実 験 を 行 った 。
一 定 分 量 の 抗 GD3/GD28 活 性 化 PBMG か ら、 適 切 な 系 列 特 異 的 モ ノ ク ロ ー ナ ル
抗 体 を 抱 合 した 免 疫 ビー ズ を使 用 して GD1 9+B 細 胞 、 GD4+T 細 胞 、 GD8+T 細 胞 、 G
D 1 4+単 核 球
を 除 去 した 。
除 去 処 理 を行 わ な い もの （
mock)
Gを 10
と各 々 の 細 胞 除 去 処 理 を 行 った 活 性 化 PBM
g/ml の A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 存 在 下 及 び 非 存 在 下 で 培 養 した 。
24 時 間 後 、 培 養 液 上 清 中 の ケ モ カ イ ン を EL I SA に よ り定 量 した 。
[0055]
その結 果 を図 1 2 に示す 。
図 1 2 に 示 す 通 り、 GD1 4+単 核 球 を 除 去 した 場 合 に 、 ；- ケ モ カ イ ン の 合 成
が 最 も顕 著 に 減 少 し、 次 い で 、 GD4+T 細 胞 及 び GD8+T 細 胞 を 除 去 した 場 合 に 、
- ケ モ カ イ ン の 合 成 が 減 少 す る傾 向 が あ った 。
しか しな が ら、 GD1 9+B 細 胞 を 欠 損 させ た 場 合 の ; - ケ モ カ イ ン の 合 成 は 、 最
も減 少 しな か った 。
これ らの 結 果 は 、 単 核 球 と と も に 活 性 化 T細 胞 が 、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体
に 応 答 して 、 ；- ケ モ カ イ ン を 分 泌 して い た こ と を 示 唆 して い る 。
[0056]
( 9 ) 様 々 な HI V- 1 株 種 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 感 染 抑 制 効 果
A 1 20 モ ノ
ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 抑 制 範 囲 を検 証 した 。
一 定 分 量 の 抗 GD3/GD28 活 性 化 PBMG を 15種 類 の 異 な つた HI V-1 株 に 感 染 させ 、
10 〃g/ml の A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 存 在 下 若 し くは コ ン トロー ル と して の I g G
の 存 在 下 培 養 を 行 った 。 そ して 、 感 染 5 日後 、 上 清 中 の p24 濃 度 を 定 量 した 。
[0057]
結 果 を図 1 3 に示す 。
図 1 3 に 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 存 在 下 培 養 した も の は 、 10種
の R5 ウ ィ ル ス 株 、 3種 の X4 ウ ィ ル ス 株 、 2種 の R5/X4 両 指 向 性 ウ ィ ル ス 株 全 て に
お し、て 一 様 に p24 の 濃 度 減 少 が 認 め られ た 。
[0058]
( 1 0 ) そ の 他 の 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 の 評 価
12 G 5 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 7 1 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 72 モ ノ ク ロ一
ナ ル 抗 体 、 MAB1 73 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 に よ る 抑 制 効 果 を 図 1 4 及 び 図 1 5 に
示す 。
な お 、 実 験 方 法 及 び 評 価 方 法 等 は 、 上 記 「 （1 ) 活 性 化 PBMG ( — 次 ） へ の
R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に 対 す る 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 効
果 」 の 項 及 び 「 （7 )
A 1 20 モ
ノ ク ロー ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性
—ケ
モ カ イ ン産 生 の 誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン 」 の 項 と 同 様 で あ る
ま た 、 12 G 5 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 EGL1 及 び EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結
合 し、 MAB1 7 1 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 72 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 73 モ ノ
ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 す る 。
[0059]
図 1 4
MAB1 7 1 モ
( a ) 及び図 1 4
( b ) に 示 す よ う に 、 12 G 5 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、
ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 72 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 73 モ ノ ク ロ一
ナ ル 抗 体 、 全 て に お い て 、 R5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス の 増 殖 が 抑 制 され る こ
とが わ か る 。
更 に 、 図 1 5 に 示 す よ う に 、 MAB1 73 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の 感 作 に よ っ て 、 A
120 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 感 作 時 と 同 様 に 、 GGR 5 結 合 性
— ケ モ カ イ ン で あ るM
I P-1 ひ産 生 が 誘 導 され て い る こ とが わ か り、 GGR5 受 容 体 の ダ ウ ン モ デ ュ レー
シ ヨン が 起 こ っ て い る こ とが わ か る 。
つ ま り、 これ らの 結 果 に よ り、 EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 す る モ ノ ク
口一 ナ ル 抗 体 も ま た 、 X4 ウ ィ ル ス の み な らず R5 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 害 す る こ
とが わ か る 。
[0060]
以 上 の よ う に 、 本 件 に お い て は 、 EGL3 を 有 す る ェ ピ ト一 プ と結 合 す る ラ ッ
ト抗 ヒ トGXGR4 A80 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 す る
マ ウ ス 抗 ヒ トGXGR4
MB1
73 (MB1 7 1 及 び MB1 72) モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 が R5 ウ ィ ル
ス 株 及 び X4 ウ ィ ル ス 株 双 方 の 活 性 化 PBMG へ の 感 染 を 阻 害 す る こ とが わ か った
そ して 、 特 に 、 EGL1 及 び EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 す る ラ ッ ト抗 ヒ トG
XCR4 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 R5 ウ ィ ル ス 株 及 び X4 ウ ィ ル ス 株 双 方 の 活 性
化 PBMG へ の 感 染 を 顕 著 に 阻 害 す る こ とが わ か った 。
この メカニズ ム の模 式 図 を図 1 6 に示す 。
X4 ウ ィ ル ス 株 の 感 染 抑 制 に 関 して は 、 A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 及 び 他 の EGL
2領 域 に 反 応 す る 抗 体 は 、 X4 ウ ィ ル ス が GXGR4 に 結 合 す る こ と を 直 接 的 に 妨 害
す る。
つ ま り、 A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 及 び 他 の EGL2 領 域 に 反 応 す る 抗 体 自 らが G
XGR4 受 容 体 に 結 合 して 、 X4 ウ ィ ル ス が GXGR4 に 結 合 す る こ と を 阻 止 す る 。
ま た 、 R5 ウ ィ ル ス 株 の 感 染 抑 制 に 関 して は 、 主 と して 、 A 1 20 モ ノ ク ロ一 ナ
ル 抗 体 及 び 他 の EGL2 領 域 に 反 応 す る 抗 体 の 刺 激 に よ りGGR5 結 合 性
- ケモカ
イン （
特 に 、 MI P-1 ひ） の 産 生 が 促 され る こ と に よ っ て GGR5 受 容 体 の ダ ウ ン モ
デ ュ レー シ ヨン が 起 こ り、 R5 ウ ィ ル ス が 感 染 す る こ とが 阻 止 され る 。
この よ う に 、 本 発 明 に 係 る GXG ケ モ カ イ ン 受 容 体 抗 体 で あ る A 1 20 抗 体 （
Ant i
-CXCR4 EGL 1&2 抗 体 ） 等 は 、 X4 ウ ィ ル ス の み な らず R5 ウ ィ ル ス へ の 感 染 を も
阻 害 す る も の で あ り、 今 後 、 臨 床 的 な 利 用 を も期 待 され る も の で あ る と と も
に 、 A I DS 撲 滅 の 一 助 と な る こ とが 大 き く期 待 され る も の で あ る 。
請 求 の範 囲
ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の 標 的 細 胞 〜 の 感 染 を 阻 害 す る 阻 害 物 質 で あ
つて 、
該 阻 害 物 質 は 、前 記 標 的細 胞 に発 現 す る
ひ
- ケ モ カ イ ン受容 体 に対
して 結 合 特 異 性 を 有 す る モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 で あ る こ と を 特 徴 とす る
ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 。
前記
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ り、 前 記 阻 害 物 質 で あ る前 記
モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 で あ る こ と を 特 徴
とす る 請 求 項 1 に 記 載 の ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 。
前 記 阻 害 物 質 は 、 前 記 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の う ち 、 前 記 標 的 細 胞
に 発 現 す る ; - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HIV
-
R5 ウ ィ ル ス 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4
を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 X4 ウ ィ ル ス 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現
す る ; - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 及 び
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 の 双 方
を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 R5X4 ウ ィ ル ス 、 全 て の 感 染 を 阻 害
す る こ と を 特 徴 とす る 請 求 項 1 又 は 請 求 項 2 に 記 載 の ヒ ト免 疫 不 全 ゥ
ィル ス 感 染 阻害物 質 。
前記
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ る と と も に 、 前 記 阻 害 物 質 で
あ る前 記 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 で あ り、
前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 前 記 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ
突 出 して い る前 記 GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 少 な く と も
第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ
ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 、 若 し くは 、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三
次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る こ と を 特 徴 とす る 請 求 項 1 又 は
請 求 項 2 に 記 載 の ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 。
前記
ひ
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ る と と も に 、 前 記 阻 害 物 質 で
あ る前 記 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 で あ り、
前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 前 記 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ
突 出 して い る前 記 GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 少 な く と も
第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ
ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ り、
前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 は 、 前 記 GXGR4 に 結 合 す る こ と に よ
り、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ひ- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 を補 助 受 容 体
と して 利 用 す る HI V-1 X4 ウ ィ ル ス の 前 記 GXGR4 へ の 結 合 を 阻 害 す る こ
と に よ り、 前 記 HI V-1
X4 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る と と も に 、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル
抗 体 の 前 記 GXGR4 へ の 結 合 に よ り誘 起 され る
記 標 的細 胞 に発 現 す る
シ ヨン され た 結 果 、 前 記
_ ケ モ カ イ ン に よ り、 前
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 が ダ ウ ン モ デ ュ レー
- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 を補 助 受 容 体 と し
て 利 用 す る HI V-1 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る こ と を 特 徴 とす る 請 求
項 1 乃 至 請 求 項 3 い ず れ か 一 項 に 記 載 の ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻
害物質。
INTERNATIONAL
A.
CLASSIFICATION
C 0 7K1
6/28
International application No.
SEARCH REPORT
I
PCT / JP2 0 1 1 / 0 6 2 0 0 7
OF SUBJECT MATTER
(2 0 0 6 . 0 1 ) i ,
C 1 2P21
/ 0 8 (2 0 0
1 )
According to International Patent Classification (IPC) or to both national classification and IPC
B.
FIELDS SEARCHED
Minimum documentation searched (classification system followed by classification symbols)
C07K1 6/ 2 8 ,
C1 2 P2 1 / 0 8
Documentation searched other than minimum documentation to the extent that such documents are included in the fields searched
Jitsuyo
Kokai
Shinan
Koho
Jitsuyo
1922-1
Shinan
Koho
996
Jitsuyo
1 971-2011
Shinan
Toroku
Jitsuyo
Toroku
Koho
1996-2011
Shinan
Koho
1994-2011
Electronic data base consulted during the international search (name of data base and, where practicable, search terms used)
CA/
B I 〇S I S /MEDLINE
/WPI
DS (STN ) ,
JST
Plus
/ JMEDPlus
/ JST
7
8 0 ( JDreaml
l )
DOCUMENTS CONSIDERED TO BE RELEVANT
C.
Category*
Citation of document, with indication, where appropriate, of the relevant passages
X/ Y
K
,
recogni
CXCR4
R . ,
e t
a l . ,
z i ng
the
thi
i nduce
enhance
s
on . ,
que
monoclonal
extracel
l ymphocyte
human
1 -mediated
i nfecti
s
Uni
r d
immunode
f
syncyt
ium
J .
V i r o l . ,
antibody
lular
loop
aggluti
nati
ciency
v i r u s
f o rmati
on
and
2 00 1 . 12 ,
Relevant to claim No.
on
-5 / 1 - 5
o f
and
type
product
Vo l . 75 ,
ive
No . 2 3 ,
p . 1 15 3 4- 1 15 43
X/ Y
CARNEC
ant
,
X . ,
ibodie
d i f f e r
s
s
i nhibit
type
gni
ent
1 . ,
J .
e t
a l . ,
r e cogni
f i cantl
r y
o f
V i rol
Ant
z ing
y
i n
human
. ,
i -CXCR4
ove
monoclonal
r l appi
thei
r
abi
immunode
2 005 . 02 ,
f
Vol
-5 / 1 - 5
ng
epi
tope
l
t y
t o
ciency
. 7 9 ,
s
v i r u s
No . 3 ,
p . 1 93 0- 1 933
See patent family annex.
Further documents are listed in the continuation of Box C .
*
"A
Special categories of cited documents:
document defining the general state of the art which i s not considered
to be of particular relevance
"
later document published after the international filing date or priority
date and not in conflict with the application but cited to understand
the principle or theory underlying tiie invention
"E
earlier application or patent but published on or after the international
filing date
"X"
L
document which may throw doubts on priority claim(s) or which i s
cited t o establish the publication date of another citation or other
special reason (as specified)
document of particular relevance; the claimed invention cannot be
considered novel or cannot b e considered t o involve an inventive
step when the document i s taken alone
"Y"
document of particular relevance; the claimed invention cannot be
considered t o involve an inventive step when the document i s
combined with one or more other such documents, such combination
being obvious to a person skilled in the art
"&"
document member of the same patent family
"O"
document referring t o an oral disclosure, use, exhibnion or other means
"P"
t o the international filing date but later than
Date of the actual completion of the international search
02
Augu
st ,
2 0 11
(02 . 0 8 . 11 )
Name and mailing address of the ISA/
Japane
s e
Patent
Date of mailing of the international search report
0 9
Augu
Authorized officer
Of f i c e
Facsimile No.
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (July 2009)
Telephone No.
st ,
2 0 11
(0 9 . 0 8 . 11 )
INTERNATIONAL
SEARCH REPORT
International application No.
PCT / JP2 0 1 1 / 0 6 2 0 0 7
C (Continuation).
Category*
A
DOCUMENTS
CONSIDERED
TO B E RELEVANT
Citation of document, with indication, where appropriate, of the relevant passages
Yuet s u TANAKA , " H I V Kans e n Z o sho k u o Yokus e i
suru
Futat
s u n o Hoho ： J u o Saibo
Vacci n e t o
0 X 0 Shigeki
, The Journal
o f A I DS Re s earch ,
2 0 November
2 0 1 0 ( 2 0 . 1 1 . 2 0 1 0 ) , vol . 1 2 , n o . 4 ,
page
3 0 5 , SY1 0 - 1 )
Form PCT/ISA/2 10 (continuation of second sheet) (July 2009)
Relevant to claim No.
1- 5
国際出願番号
国際調査報告
発明の属す る分野の分類 （
国際特許分類 （I
A .
Int .Cl .
C07K16/28
(2006. 01) i ， C12P21/08
調査 を行った分野
B .
調査を行った最小限資料 （
国際特許分類 （I
Int .Cl .
C07K16/28,
J P 2 0 1 1 /
P C T
0 6 2 0 0 7
P C ) )
(2006. 01) n
P C ) )
C12P21/08
最小限資料以外の資料で調査 を行った分野に含まれ るもの
日本国実用新案公報
日本国公開実用新案公報
日本国実用新案登録公報
日本国登録実用新案公報
1 9 2 2 — 1 9 9 6
1 9 7 1 — 2 0 1 1
1 9 9 6 — 2 0 1 1
1 9 9 4
2 0 1 1
年
年
年
年
国際調査で使用 した電子データベ ー ス （
データベ ー ス の 名称、調査に使用 した用語）
(STN) ， JSTPlus/JMEDPlus/JST7580
CA/BIOSIS/MEDLINE/WPIDS
(JDreamll)
関連す ると認め られ る文献
引用文献の
カテゴリ一 水
引用文献名 及び一部の箇所が関連す るときは、その関連す る箇所の表示
C .
X /
Y
AN
A , R., et al., Unique
extracellular
loop
of
monoclonal
CXCR4
enhances
human
formation
and productive
antibodv
induces
immunodeficiency
lymphocyte
virus
infection.,
recognizing
type
J . Virol.,
the third
agglutination
1-mediated
関連す る
請求項 の 番号
1 -
5 /
1
- 5
and
syncytium
2001 . 12, Vol.75,
No. 3,
p .11534- 11543
X /
CARNEC,
Y
X.,
overlapping
human
et al.,
Anti-CXCR4
monoclonal
epitopes differ significantly
immunodeficiency
virus
i n their ability
type 1 .,
. Virol.,
c 欄の続きにも文献が列挙 されている。
*
引用文献のカテ ゴリー
」特に関連のある文献ではなく、一般的技術水準を示す
もの
ΓΕ 」国際出願 日前の出願 または特許であるが、国際出願 日
以後に公表 されたもの
「
L 」優先権主張に疑義を提起す る文献又は他の文献の発行
日若 しくは他 の特別 な理 由を確立す るために引用す
る文献 （
理 由を付す）
Γθ 」 口頭による開示、使用、展示等に言及す る文献
「
Ρ 」国際出願 日前で、かつ優先権の主張の基礎 となる出願
0 2 .
0 8 .
1- 5/
1- 5
entry of
2005.02, Vol.79, No. 3,
の 日の後に公表 された文献
「
T 」国際出願 日又は優先 日後に公表 された文献であって
出願 と矛盾す るもの で はなく、発明の原理又は理論
の理解のために引用す るもの
「
X 」特に関連のある文献であって、当該文献のみで発明
の新規性又は進歩性がない と考えられ るもの
ΓΥ 」特に関連のある文献であって、当該文献 と他の 1 以
上の文献 との、当業者 にとって 自明である組合せ に
よって進歩性がない と考えられ るもの
Γ& 」同一パ テ ン トファミリー文献
2 0 1 1
0 9 .
2 1 0
(第 2 ページ） （2
0 8 .
特許庁審査官 （
権限のある職員）
国際調査機 関の名称及びあて先
日本国特許庁 （I S A
J Ρ )
郵便番号 1 0 0 — 8 9 1 5
東京都千代 田区霞が関三丁 目4 番 3 号
l S A
t o mnibit
国際調査報告の発送 日
国際調査を完了 した 日
C T
recognizing
パ テ ン トフ ァ ミ リー に関す る別紙 を参照。
ΓΑ
様式 P
antibodies
長谷川
電話番号
0 0 9
年 7 月）
2 0
1
4 Β
4 8 6 7
茜
0 3 — 3 5 8 1 — 1 1 0 1
内線
3 4 4 8
国 際調 査 報 告
C
(続 き） .
国 際 出願 番 号
P C
P 2 0
関連 す る と認 め られ る文 献
引用 文 献 の
カ テ ゴ リー *
引用 文 献 名
及 び一 部 の箇 所 が 関連 す る とき は 、 そ の 関連 す る箇 所 の表 示
p.1930-1933
A
田中勇 悦 ， HIV 感 染 増殖 を抑 制す る 二 つ の 方 法 : 樹 状 細 胞 ワ ク チ ン と 0X40 刺
激 ， 日本 エ イ ズ学会誌 ， 2010. 1 1. 0, Vol. 12, No. 4 , p . 305,
様式 P C T
0 6 2 0 0 7
I SA
2 1 0
(第 2 ペ ー ジ の 続 き） （2 0 0 9 年 7 月）
SY10- 1)
関連 す る
請 求 項 の番 号