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8 卜 〇 A (12) 特 許 協 力 条 約 に 基 づ い て 公 開 され た 国 際 出 願 (10) 国 際 公 開 番 号 (43) 国 際 公 開 曰 2012 年 11 月 29 日 ( 29.11.2012) W 画P O 国際特 許分 類 : (51) C07K 16/28 国際 出願 番 号 : (22) 国 際 出願 日: 指定国 ( 表 示 の な い 限 り、 全 て の 種 類 の 国 内 保 護 が 可 肯 ) : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, (81) (2006.01) (21) W O 2012/160678 A 1 PCT C12P 21/08 (2006.01) BB, PCT/JP20 年 201 1 5 月 1 1/062007 曰(25.05.201 1) 25 BG, BH, BR, GB, GD, GE, GH, JP, KE, KG, (25) 国際 出願 の 言 語 : 日本 語 LT, (26) 国際 公 開の 言語 : 日本 語 MY, (71) 出願 人 ( 米 国 を 除 く全 て の 指 定 国 に つ い て ) :国 立 大 学 法 人 ί 球 大 学 (University o f the Ryukyus) 〒 9030213 沖 緙 県 中 頭 郡 西 原 町 字 千 原 1 [JP/JP]; 番 地 Okinawa (JP). 株 式 会 社 琉 球 免 疫 研 究 所 (Ry〒 9042234 沖 ukvu Immunology Corporation) [JP/JP]; 緙 県 う る ま 巿 字 州 崎 5 番 地 1 Okinawa (JP). LU, KM, LY, MZ, 発 明 者 ;お よ び 発 明者 /出願 人 ( 米 国 に つ い て の み ) :田 中 勇 悦 〒 9030215 沖 緙 県 中 頭 郡 (TANAKA, Yuetsu) [JP/JP]; 西原 町字 上原 2 0 7 番 地 国立 大学 法 人琉球 大 学 大 学 院 医 学 研 究 科 内 Okinawa (JP). (75) 代 理 人 :秋 山 敦 , 外 (AKIYAMA, Atsushi 東 京都 港 区虎 ノ門 3 丁 目 5 番 1050001 ョ3 7 森 ビル Tokvo (JP). (74) ;〒 号虎ノ et al.) 1 GM, BZ, CA, DO, DZ, GT, HN, KP, KR, MD, ME, CH, HR, HU, KZ, LA, MG, CL, ID, CO, YL, IN, LC, LK, MK, NG, NI, NO, NZ, OM, TN, TR, TT, TZ, UA, CN, EC, EE, EG, ES, FI, MN, IS, LR, LS, MW, MX, PE, PG, PH, PL, PT, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, TH, TJ, TM, ZA, ZM, BY, DM, KN, MA, NA, RO, RS, RU, (72) BW, CR, CU, CZ, DE, DK, ST, SV, UG, US, UZ, VC, SY, VN, ZW. 指定国 ( 表 示 の な い 限 り、 全 て の 種 類 の 広 域 保 護 が 可 肯巨) :ARIPO (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, ユ ー ラ シア MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW), ョ一 ロ ッパ (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), (84) 丁 5o 7 2 5 (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, GB, GR, HR, HU, IE, IS, ΓΓ , LT, LU, NL, NO, RO, (BF, BJ, CF, CG, PL, PT, RS, CI, CM, SE, SI, SK, GA, GN, EE, ES, FI, FR, LV, GQ, MC, SM, GW, MK, MT, TR), OAPI ML, MR, NE, SN, TD, TG). 規則 4.17 に規 定 す る 申立 て : 不 利 に な らな い 開 示 又 は 新 規 性 喪 失 の 例 外 に 関 す る 申立 て ( 規 則 4 . 17(v)) 一 [続 葉 有 ] (54) Title: (54) 発 明 の 名 称 :ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 [ 図 3] 5 17. 5 15. Q 12. 5- HIV-1 JR-FL I V-1 NL4-3 X4 175 10 . 0 7. 5 5. 0 2. 5 0 0. 0 Contro l (57) Abstract: [Problem] us, whilst also providing X 4 virus but also against hibitory substance monoclonal CXCR4, antibody 5 A T o provide a substance a substance for inhibiting R 5 virus, which inhibits having and the monoclonal A120 for blocking the infection binding antibody specincity which CXCR4 infection and thus effectively for an b y human stopping o f a target functioning cell b y human receptor substance A 5 A 20 A80 a s a coreceptor immunodeficiency the onset o f human -chemokine i s an inhibitory Control A80 virus and stopping whicn immunodeficiency immunodeficiency appearing i s an anti-CXCR4 syndromes. virus. i n a target infection i s effective This cell. This monoclonal inhibitory b y X 4 vir not just [Solution] against A n in substance -chemokine receptor is a is antibody. 要 約 : 【課 題 】 補 助 受 容 体 と して 機 能 す る CXCR4 を ブ ロ ッ ク して X 4 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る 物 質 を 提 供 す る と と も に 、 X 4 ウ ィ ル ス の み な らず R 5 ウ ィ ル ス に も 有 効 な ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 を 提 供 し、 ヒ ト免 疫 不 全 症 候 群 の 発 症 を 有 効 に 阻 止 す る こ と に あ る 。 【 解 決 手 段 】 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の 標 的細 胞 へ の感 染 を阻害 す る阻 害 物 質 に 関 す る。 この 阻 害 物 質 は 、 標 的 細 胞 に 発 現 す る α- ケ モ カ イ ン 受 容 体 に 対 して 結 合 特 異 性 を 有 す る モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 で あ る 。 この α - ケ モ カ イ ン 受 容 体 は CXCR4 で あ リ、 阻 害 物 質 で あ る モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 抗 CXCR4 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 で あ る 。 (57) 添付 公 開書 類 : - 国際調 査 報 告 ( 条 約 第 2 1 条 (3)) 明 細 書 発 明 の 名 称 : ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 技術分野 [0001 ] 本 発 明 は 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 に 関 し、 特 に 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の 感 染 増 殖 を 阻 害 す る こ と に よ りA I DS 発 症 を 防 止 す る こ とが 可 能 な ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 に 関 す る も の で あ る 。 背景技術 [0002] ヒ 卜に 感 染 す る ウ ィ ル ス に よ っ て 様 々 な 感 染 症 が 引 き起 こ され る こ と は 従 来 よ り知 られ て お り、 この 感 染 症 の 撲 滅 は 世 界 平 和 を 実 現 す る た め の 世 界 共 通課題 の一 つで ある。 この よ うな ウ ィ ル ス 感 染 症 の 一 種 で あ る 後 天 性 免 疫 不 全 症 候 群 (エ イ ズ ;A I DS) は 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス (以 下 、 「HIVウ ィ ル ス 」 と記 す ) の 感 染 に よ る もの で あ る 。 これ は 、 ヘ ル パ ー T 細 胞 が 破 壊 され た 結 果 、 免 疫 能 力 が 極 端 に 低 下 す る こ と に よ り、 他 の 病 原 体 に 日和 見 感 染 す る こ とが 原 因 で 罹 患 す る疾 病 で あ る 。 な お 、 HIVに は 、 ウ ィ ル ス の 起 源 に よ りHI V-1 と HIV-2 の 2 つ の タ イ プ が 存 在 す る。 [0003] HI V-1 ウ ィ ル ス が 増 殖 す る と と も に 細 胞 死 を 誘 導 す る細 胞 が 、 主 と して GD4 陽 性 の T リンパ 球 や マ ク ロ フ ァー ジ で あ る こ とか ら、 この HI V-1 ウ ィ ル ス の 主 要 な 受 容 体 が GD4 分 子 で あ る こ と は 、 従 来 よ り知 られ て い る 。 これ は 、 GD4 分 子 の 対 す る モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 が 感 染 を 阻 害 す る こ とや 、 GD 4 を発 現 して い な い ヒ ト上 皮 系 細 胞 に GD4 を発 現 させ る こ と に よ り感 染 が 成 立 す る こ と な どか ら検 証 され て い る 。 し力、し、 GD4 を 強 制 発 現 させ て も 、 完 全 に 感 染 が 成 立 す る わ け で は な い こ と か ら、 GD4 は 主 要 な 受 容 体 で は あ っ て も 、 これ の み で は 完 全 に 感 染 が 起 こ る わ け で は な く、 何 らか の 要 因 が 必 要 で あ る こ とが わ か っ て い た 。 [0004] この よ うな 状 況 下 、 HI V-1 ウ ィ ル ス の 感 染 に お い て は 、 受 容 体 と して の GD4 必 要 で あ る と と も に 、 補 助 受 容 体 と して 、 GXGR4 と GGR5 が 関 与 して い る こ とが わ か った 。 GXGR4 及 び GGR5 は 、 白血 球 遊 走 活 性 を 有 す る た ん ぱ く質 で あ る ケ モ カ イ ン ( chemok i ne) の 受 容 体 で あ る 。 この ケ モ カ イ ン 受 容 体 は 、 G タ ンパ ク 質 共 役 型 受 容 体 ( GPGR) で あ り、 一 般 的 に は 、 ホ モ ォ リゴ マ 一 若 し くは へ テ ロオ リゴ マ ー と して 細 胞 表 面 に 存 在 す る。 [0005] HI V-1 ウ ィ ル ス は 、 自 己 の エ ン ベ ロー プ ス パ イ ク で あ る gp1 20 を 、 感 染 標 的 細 胞 表 面 の 受 容 体 GD4 に 結 合 させ る こ と に よ り感 染 標 的 細 胞 表 面 に 連 結 す る 。 次 い で 、 gp1 20 の 立 体 構 造 を 変 化 させ る こ と に よ り、 gp1 20 を補 助 受 容 体 ( G XGR4 又 は 及 び GGR5) に 結 合 させ る 。 そ して 、 この 状 態 で 、 gp41 の N 末 端 に 存 在 す る フ ユ 一 ジ ョン ペ プ チ ドを細 胞 の 脂 質 二 重 膜 に 突 き刺 す 。 次 い で 、 gp41 の 2 個 の ひ一 ヘ リ ッ ク ス 構 造 が お 互 い に 反 応 す る こ と に よ り 、 ヘ ア ピ ン構 造 が と られ 、 HI V-1 ウ ィ ル ス は 細 胞 表 面 に 近 接 して い く。 最 終 的 に は 、 膜 融 合 が 起 こ り、 HI V-1 ウ ィ ル ス は 自身 の ゲ ノ ム を細 胞 内 に 侵 入 させ て 感 染 が 実 行 され る 。 [0006] — 方 、 HI V-1 ウ ィ ル ス に は 、 GD4 陽 性 の 抹 消 血 リンパ 球 と マ ク ロ フ ァー ジ で 増 殖 可 能 な ウ ィ ル ス (マ ク ロ フ ァー ジ 指 向 性 HI V-1 ウ ィ ル ス ) と 、 GD4 陽 性 の T リンパ 球 と T細 胞 株 で 増 殖 可 能 な ウ ィ ル ス ( T細 胞 株 指 向 性 HI V-1 ウ ィ ル ス ) とが 存 在 して い る 。 そ して 、 マ ク ロ フ ァー ジ 指 向 性 HI V-1 ウ ィ ル ス は 、 GGR5 分 子 を補 助 受 容 体 と して 必 要 とす る こ とが 検 証 され て い る と と も に 、 T細 胞 株 指 向 性 HI V-1 ウ ィ ル ス は 、 GXGR4 を補 助 受 容 体 と して 必 要 とす る こ とが 検 証 され て い る 。 な お 、 この よ うな 補 助 受 容 体 の 利 用 能 力 に よ り、 HI V-1 ウ ィ ル ス を 分 類 す る こ と も あ り、 補 助 受 容 体 と して GGR5 を 利 用 す る HI V-1 ウ イ ル ス は R5 ウ ィ ル ス と 命 名 され て お り、 補 助 受 容 体 と して GXGR4 を 利 用 す る HI V-1 ウ ィ ル ス は X4 ウ イ ル ス と命 名 され て い る 。 ま た 、補 助 受 容 体 と して GGR5 及 び GXGR4 の 双 方 を利 用 す る もの は 、 R5X4 ウ イ ル ス と命 名 され て い る 。 [0007] この よ うに 、 H I V-1 ウ ィ ル ス は 、 感 染 の た め に補 助 受 容 体 を使 用 す るの で あ るか ら、 これ らの 補 助 受 容 体 に H I V-1 ウ ィ ル ス が 結 合 す る前 に 、補 助 受 容 体 を ブ ロ ックす る こ とに よ り、 H I V-1 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 害 す る こ とが で き る こ と が 示 唆 され る 。 実 際 、 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 は 、 GGR5 の 正 常 リガ ン ドの ケ モ カ イ ンで あ る MI P-1 ひ 、 MI P_1 、RANTES 等 で 阻 害 され 、 X4 ウ ィ ル ス の 感 染 は 、 GXGR4 の 正 常 リガ ン ドの ケ モ カ イ ンで あ る SDF-1 ひ で 阻 害 され る 。 以 上 の 知 見 に よ り、 GGR5 及 び 又 は GXGR4 へ の H I V-1 ウ ィ ル ス の 結 合 を 阻 害 して 、 H I V-1 ウ ィ ル ス 感 染 を 阻 害 す る技 術 が 開発 され て い る ( 例 えば、特 許 文 献 1 及 び特 許 文献 2 参 照 ) 。 先行技 術 文献 特許 文献 [0008] 特 許 文 献 1 :特 開 2 0 0 6 _ 1 8 8 4 4 5 号 公 報 特 許 文 献 2 :特 表 2 0 0 6 — 5 0 3 8 4 9 号 公 報 発 明 の概 要 発 明 が 解 決 しょ う とす る課 題 [0009] この よ うな 知 見 の 元 、 多剤 併 用 療 法 に 変 わ る新 た な 治 療 薬 と して 、 ケ モ カ イ ン受 容 体 阻 害 剤 が 開発 され て い る 。 例 え ば 、 GGR5 阻 害 剤 と して は 、 「 Marav i roc 」 や 「 V i c r i v i roc 」 が例 示 され る。 し力、し、 GXGR4 阻 害 剤 と して 開発 され た 「 AMD31 00 」 は 、 一 部 の 患 者 に 重 篤 な 副 作 用 が 認 め られ た こ とか らH I V-1 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 剤 と して の 臨 床 は打 ち 切 られ て い る ( 他 の 疾 病 用 の 薬 剤 と して は使 用 され て い る) 。 [001 0 ] この よ うな 状 況 下 、 感 染 に補 助 受 容 体 と して GXGR4 を利 用 す るX4 ウ ィ ル ス に 対 して 有 効 に感 染 を 阻 止 す る物 質 の 開発 が 早 急 に 望 まれ て お り、 ま た 、 更 に 、 GGR5 及 び GXGR4 双 方 へ の 結 合 を 阻 害 す る こ とが 可 能 で あ り、 感 染 に 補 助 受 容 体 と して GGR5 を 利 用 す る R5 ウ ィ ル ス に も併 せ て 効 果 を 有 す る 物 質 の 開 発 が 望 まれ て いた 。 [001 この よ うな 状 況 下 、 発 明 者 らは 鋭 意 研 究 を 重 ね 、 あ る種 の GXG ケ モ カ イ ン 受 容体抗体 を (ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 抗 体 )を 用 い る こ と に よ っ て 、 X4 ウ ィ ル ス の 感 染 の み な らず 、 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 も ま た 阻 害 す る こ とが 可 能 で あ る と い う 知 見 を得 た 。 つ ま り、 GXG ケ モ カ イ ン 受 容 体 抗 体 で あ る Ant i _GXGR4 ECL 3抗 体 (以 下 、 単 に 「 A80 抗 体 」 と記 載 ) 、 Ant i -CXCR4 ECL 2抗 体 で あ る MAB1 7 1 抗 体 , MAB1 72 抗 体 , MAB1 73 抗 体 が 、 GXGR4 を ブ ロ ッ ク して X4 ウ ィ ル ス の 結 合 を 阻 害 す る だ け で は な く、 これ らの 抗 体 が R5 ウ ィ ル ス の 感 染 も ま た 阻 害 す る と い う知 見 を 得 た もの で あ る 。 ま た 、 特 に 、 GXG ケ モ カ イ ン 受 容 体 抗 体 で あ る Ant i _GXGR4 ECL 1&2 抗 体 (以 下 、単 に 「 A 1 20 抗 体 」 と記 載 ) が 、 GXGR4 を ブ ロ ッ ク して X4 ウ ィ ル ス の 結 合 を 顕 著 に 阻 害 す る だ け で は な く、 この A 1 20 抗 体 が R5 ウ ィ ル ス の 感 染 も ま た 顕 著 に 阻 害 す る と い う知 見 を 同 時 に 得 た も の で あ る 。 [001 2] 本 発 明 の 目的 は 、 上 記 課 題 に 鑑 み 、 補 助 受 容 体 と して 機 能 す る GXGR4 を プ ロ ッ ク して X4 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る 物 質 を提 供 す る と と も に 、 X4 ウ ィ ル ス の み な らず R5 ウ ィ ル ス に も有 効 な ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 を提 供 し、 ヒ ト免 疫 不 全 症 候 群 の 発 症 を 有 効 に 阻 止 す る こ と に あ る 。 課 題 を解 決 す るた めの 手 段 [001 3] 上 記 課 題 は 、 本 発 明 に よれ ば 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の 標 的 細 胞 へ の 感 染 を 阻 害 す る 阻 害 物 質 を提 供 す る こ と に よ り解 決 され る 。 この 阻 害 物 質 は 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 に 対 して 結 合 特 異 性 を 有 す る モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 で あ る 。 また 、前 記 ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ り、 前 記 阻 害 物 質 で あ る前 記 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 で あ る 。 な お 、 この ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 は 、 ひ - ケモカイ ン ( GXG ケ モ カ イ ン ) で あ るSDF- 1 ひ / [001 4] 、 卜TAG の 受 容 体 で あ る 。 更 に 、 前 記 阻 害 物 質 は 、 前 記 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の う ち 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ; - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 R5 ゥ ィ ル ス 、前 記 標 的細 胞 に発 現 す る ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 X4 ウ ィ ル ス 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る 体 GGR5 及 び ひ - ケ モ カ イ ン受容 - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 の 双 方 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V - 1 R5X4 ウ ィ ル ス 、 全 て の 感 染 を 阻 害 す る 。 [001 5] そ して 、 前 記 ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ る と と も に 、 前 記 阻 害 物 質 で あ る前 記 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 で あ り、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 前 記 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ 突 出 して い る前 記 GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 少 な く と も第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 、 若 し く は 、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る 。 な お 、 少 な く と も第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 と は 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン 又 は 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 認 識 す る 抗 体 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及 び 第 2 ル ー プ ド メ ィ ン双 方 を 認 識 す る 抗 体 を 含 み 、 この GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン う ち 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン双 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を認 識 す る抗 体 が 、 本 明細 書 中 の 「 A 1 20抗 体 」 ( Ant i -GXGR4 ECL 1&2 抗 体 ) 若 し くは 12G5 抗 体 で あ り、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る抗 体 が 、 本 明細 書 中 の 「 A80 抗 体 」 ( Ant i -GXGR4 ECL 3抗 体 ) で あ る ま た 、 第 2 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 は 、 M AB1 7 1 抗 体 , MAB1 72 抗 体 , MAB1 73 抗 体 で あ る 。 [001 6] また 、前 記 ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ る と と も に 、 前 記 阻 害 物 質 で あ る前 記 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 で あ り、 前 記 抗 GX GR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 前 記 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ 突 出 して い る前 記 GX GR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 少 な く と も第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及 び 第 2 ル ー プ ドメ ィ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ り、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 は 、 前 記 GXGR4 に 結 合 す る こ と に よ り、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ひ- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HIV - X4 ウ ィ ル ス の 前 記 GXGR4 へ の 結 合 を 阻 害 す る こ と に よ り、 前 記 HI V-1 X4 ゥ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る と と も に 、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 前 記 GX GR4 へ の 結 合 に よ り誘 起 され る る - ケ モ カ イ ン に よ り、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 を ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン させ 、 結 果 と して この GGR5 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る 。 な お 、 前 述 の と お り、 少 な く と も第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 と は 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン 又 は 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 認 識 す る 抗 体 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン双 方 を 認 識 す る 抗 体 を 含 む 。 つ ま り、 A 1 20 抗 体 を 筆 頭 に 、 前 段 落 に例 示 した 各 抗 体 は 、 HI V-1 X4 ウ ィ ル ス 及 び HI V-1 R5 ウ ィ ル ス 双 方 の 感 染 を 有 効 に 阻 止 す る 。 発 明の効 果 本 発 明 に 係 る ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 は 、 HI V-1 ウ ィ ル ス の 補 助 受 容 体 で あ る GXGR 4 を ブ ロ ッ ク す る こ と に よ り、 X4 ウ ィ ル ス の 感 染 を 有 効 に 阻止 で きる。 ま た 、 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 の 中 で も 、 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ 突 出 して い る GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン 及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る A 1 2 0抗 体 は 、 GXGR4 に 結 合 す る こ と に よ りダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン を 誘 起 して 、 R 5 ウ ィ ル ス の 感 染 も 同 時 に 阻 止 す る こ とが で き る 。 この よ う に 、 本 発 明 に 係 る ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 は 、 X4 ウ イ ル ス の み な らず 、 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 も 同 時 に 阻 止 す る こ とが で き る 。 よ っ て 、 特 に 、 X4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ウ ィ ル ス の 感 染 に よ る ヒ ト免 疫 不 全 症 候 群 の 発 症 を 有 効 に 防 止 す る こ とが 可 能 と な る 。 図面 の簡 単 な説 明 [ 図 1]X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に つ い て の 模 式 図 で あ る 。 [ 図 2] PBMG ( 抹 消 血 単 核 球 ) の 活 性 化 と HI V-1 の 感 染 ス キ ー ム を 示 す 流 れ 図 で [ 図 3] 活 性 化 PBMG ( — 次 ) へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び Χ4 ウ ィ ル ス の 感 染 に 対 す る 抗 G XGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 効 果 を 示 す グ ラ フ で あ る 。 [ 図 4] Α120 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の Χ4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ウ ィ ル ス 感 染 抑 制 効 果 を 示 す グ ラ フで あ る。 [ 図 5] 関 連 性 の な い複 数 の ドナ 一 由 来 の 活 性 化 PBMG に 対 す る Α120 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の HI V-1 生 成 抑 制 効 果 を 示 す グ ラ フ で あ る 。 [ 図 6] 活 性 化 PBMG で の R5 ウ ィ ル ス 及 び Χ4 ウ ィ ル ス 抑 制 効 果 に お け る Α120 モ ノ ク 口ー ナ ル 抗 体 の 濃 度 依 存 性 を 示 す グ ラ フ で あ る 。 [ 図 7] HI V-1 産 生 細 胞 株 及 び HTLV-1 産 生 細 胞 株 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 影 響 を示 す グ ラ フで あ る。 [ 図 8] 活 性 化 PBMG に お け る A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 に よ る GGR 5 結 合 性 - ケ モ カ イ ン産 生 の 増 加 を 示 す グ ラ フ で あ る 。 [ 図 9] A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性 — ケ モ カ イ ン産 生 の 誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン を 示 す グ ラ フ で あ る 。 [ 図 10] A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性 — ケ モ カ イ ン産 生 の 誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン を 示 す ヒス トグ ラ ム で あ る 。 [ 図 11] A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性 — ケ モ カ イ ン産 生 の 誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン を 示 す ヒス トグ ラ ム で あ る 。 [ 図 12] T 細 胞 と単 核 球 に お け る A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 刺 激 に よ る ; - ケ モ 力 イ ン産 生 を 示 す グ ラ フ で あ る 。 [ 図 13] 様 々 な HIV- 株 種 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 感 染 抑 制 効 果 を 示 す グ ラ フで あ る。 [ 図 14] 活 性 化 PBMG ( — 次 ) へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に 対 す る 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 効 果 を 示 す グ ラ フ で あ る 。 [ 図 15] 活 性 化 PBMG に お け る A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 及 び MAB1 73 モ ノ ク 口_ ナ ル 抗 体 に よ る GGR 5 結 合 性 — ケ モ カ イ ン産 生 の 増 加 を 示 す グ ラ フ で あ る 。 [ 図 16]A1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の X4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 メ カ 二 ズ ム を示 す 模 式 図 で あ る。 発 明 を実施 す るた めの 形 態 [001 9] 以下 、本発 明の一実施 形態 につ いて説 明す る。 な お 、 以 下 に 説 明 す る 部 材 、 配 置 等 は 、 本 発 明 を 限 定 す る も の で は な く、 本 発 明 の 趣 旨 に 沿 っ て 各 種 改 変 す る こ とが で き る こ と は 勿 論 で あ る 。 [0020] 以 下 に 、実 験 系 及 び結 果 に つ いて説 明す る。 図 1 に 、 X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に つ い て の 模 式 図 を 示 す 。 上 述 した よ う に 、 X4 ウ ィ ル ス が 細 胞 に 感 染 す る 際 に は 、 そ の エ ン ベ ロー プ ス パ イ ク で あ る gp1 20 を細 胞 表 面 の 受 容 体 GD4 に 結 合 させ る こ とが 必 要 で あ る と と も に 、 そ の gp1 20 の 立 体 構 造 を 変 化 させ る こ と に よ り、 gp1 20 を補 助 受 容 体 で あ る GXGR4 に 結 合 させ る こ とが 必 要 で あ る 。 補 助 受 容 体 と して 作 用 す る GXGR4 は 、 ケ モ カ イ ン 受 容 体 で あ る が 、 この GXGR 4 は 、 細 胞 表 面 に 、 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン を 突 出 させ た 状 態 で 存 在 す る こ とが 知 られ て い る 。 [0021 ] 発 明 者 らは 、 この 中 で 、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る A80 ( ク ロー ン ) 、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る MAB1 7 1 , MAB1 72, MAB1 73 が 特 異 的 性 質 を 有 す る こ と を 見 出 し、 これ らの モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 と GXGR4 との 連 結 体 が 、 X4 ウ ィ ル ス の 活 性 化 PBMG ( 末 梢 血 単 核 球 ) へ の 感 染 を 阻 害 す る の み で は な く、 R5 ウ イ ル ス の 活 性 化 PBMG へ の 感 染 を も ま た 阻 害 す る こ と を確 認 した (i n v i tro) 。 ま た 、 この 中 で 特 に 、 第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る A 1 20 ( ク ロー ン ) が 特 異 的 性 質 を 顕 著 に 有 す る こ と を 見 出 し、 この A 1 20 と GXGR4 との 連 結 体 が 、 X4 ウ ィ ル ス の 活 性 化 PBMG ( 末 梢 血 単 核 球 ) へ の 感 染 を 阻 害 す る の み で は な く、 R5 ウ ィ ル ス の 活 性 化 PBMG へ の 感 染 を も ま た 大 き く阻 害 す る こ と を確 認 した (i n v i tro) 以 下 、 そ の検 証 を示 す 。 。 [0022] . ( 使用試薬及 び方法等 ) 培地 1 640 培 地 は 1 RPM I 阳 3 - 六 1 づ1 ペ ニ シ リ ン 、 1 0 0 〃 g/ml 00U/ml 単 に 「RPM I p e Cu l ture ( 2 ) ス ト レ プ トマ イ シ ン を 加 え て 調 整 し た (以 下 、 培 地 」 と記 す ) 。 抗 ヒ hCD3 ( c l one [0023] 北 . I nc. St. Lou i s , M0) に 、 1 0 % ゥ シ 胎 児 血 清 (FGS) 1 及 び 抗 GD28 ( c l one 0KT-3) Go I l ect i o n (Rockv i I le, 1 10 28. 2 ) は 、 そ れ ぞ れ Amer i can )及 び 0 1_ 6 は310 61 16 0 , Ty GA) の も の で 抗体等 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の ク ロ ー ン は 、 当 研 究 室 の WKA ラ ッ トを 免 疫 し て 作 成 した 。 A 14 5 ク ロ ー ン 、 A 1 2 0 ク ロ ー ン (l gG2b) (l gG1 ) 、 A80 ク ロ ー ン (l gG1 ) も 同様 で あ る。 これ らの 構 造 及 び 作 成 方 法 の 詳 細 は 、 文 献 1 recogn ag ted i z i n g the l u t i nat syncyt 2001 i o n and enhances i u m format ; 7 5 (23) I . 75. 23. t h i r d extrace 1 534-1 human i o n and : 1 1 534-1 543. 543 l lu lar 2001 , Tanaka l oop of i mmunodef product Prepub 「Un i q e i e l i shed CXCR4 i c i ency i nfect i onj o n 2001/1 R , Yosh monoc l ona l i nduces 1/02 as i d a A , Murakami i body l ymphocyte v i rus Journa ant type l of DO I T , et 1-med ia v i r o l ogy 0. 1 28/ V a に参 照 の こ と。 ま た 、 こ れ ら の モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 に よ っ て 認 識 さ れ る ェ ピ トー プ の 解 析 も、上 記 文 献 1 参 照 の こ と。 な お 、 1 2 G 5 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 、 MAB1 7 1 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 、 MAB1 7 2 モ ノ ク ロ 一 ナ ル 抗 体 、 MAB1 7 3 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 R&D よ り購 入 し た 。 [0024] 使 用 した ラ ッ (LAT-27 g G ア イ ソ タ イ プ コ ン ト ロ ー ル は 、 l gG2b ク ロ ー ン )と l gG1 ant i -HCV こ れ に つ しゝて の 詳 細 は 、 文 献 2 ecomb i nant second enve l ope prote enve l ope2 「New monoc i n of ant i _HTLV_1 gp46 (Mo- 8 ク ロ ー ン )で あ る 。 l ona l Hepat ant i bod i e s aga i nst i t i s C v i rusj M i crob io l a r I muno l 1988 ; 4 2 ( 1 2 ) : 875-877. , Kato N , Tanaka Prepub l i shed on 999/02/26 a s DO I , I nudoh M Y参 照 の こ と 。 ラ ッ ト抗 ヒ トC C R 5 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 T31 2 rat l gG1 ク ロー ン 由 来 の も の で あ り、 詳 細 は 、 上 記 文 献 1 参 照 の こ と 。 [0025] これ らの モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 GB. 17-SGI Dマ ウ ス 腹 水 の 硫 酸 ア ン モ ニ ゥ ム 沈 殿 、 Superdex G200 (GE) で の ゲ ル ろ過 を 行 う こ と に よ り精 製 した 。 これ らの 抗 体 の 調 整 は 、 p o l ymi x i n B c o l umn を 通 す こ と に よ り行 い 、 リポ 多 糖 (LPS) の 混 入 は 、 LAL 法 に よ り確 認 し、 リポ 多 糖 (LPS) の 濃 度 は 検 出 下 限 界 外 で あ る こ と が 確 認 され た 。 [0026] I g Gの 一 部 は 、 既 存 の 標 識 キ ッ トを 取 扱 説 明 書 に 沿 っ て 使 用 し、 A l exa r 488 、 A l exa F l uor 647 ( l n i trogen) Gy5 (GE) 、 horserad よ っ て 標 識 した (Doj i n , Kumamoto, Japan) i shperox F l uo i daselz 。 F I TC ( フ ル ォ ロセ イ ン イ ソ チ ア ネ ー ト) 標 識 若 し くは PE ( フ ィ コ エ リ トリ ン ) 標 識 抗 ヒ トGD4 、 GD8 、 GD1 4 、 GD1 9 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 Beckman-GoiH t e r 若 し くは B i oLegend よ り購 入 した 。 [0027] 使 用 した 抗 H I V-1 羊細 は 、 文 献 3 0X40 P24 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 発 明 者 の 研 究 室 で 作 成 した 。 「Suppress i o n o f CCR5-trop s t i mu l a t i o n v i a enhanced earch 0/09/22 and human retrov a s DO I 0. i ruses 089/a a i t o M , Ansar i AA, Tanaka [0028] product i c H I V type i on of beta_chemok 1 i nfect i nes 」 A I DS res 201 0 2 6 ( 1 0 ) : 1 147-1 15 4 Prepub i d . 201 0 . 0043, Tanaka R , Takahash i on by l i shed on 20 i Y , Kodama A , S Y参 照 の こ と 。 抗 ヒ トGD4 、 GD8 、 GD1 4 、 GD1 9 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 抱 合 した マ グ ネ ッ トビ ー ズ は 、 Dyna l and よ り購 入 し、 取 扱 説 明 書 に 沿 っ て 使 用 した 。 12G5 を 含 有 す る 低 ェ ン ド トキ シ ン マ ウ ス 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 は 、 B i oLegend [0029] and R&D よ り購 入 した 。 ( 3 ) H I V調 整 H I V-1 (JR_FL) 、 H I V-1 (JR_GSF) 、 H I V-1 (NL4-3) は 、 リン酸 カ ル シ ウ ム 法 に よ り、 H I V-1 感 染 性 プ ラ ス ミ ドD N A を 有 す る 293T 細 胞 の トラ ン ス フ エ ク シ ヨ ン に よ り作 成 した 。 詳細 は、文献 4 「I nduct human i mmunodef mi c e by i ntrasp oss i b l e i nvo l vement rna l o f i c i ency l en i c i o l ogy v i rus protect type i e i mmune 1 ( H I V-1 ) responses i nfect i on i mmun i zat i o n w i t h H I V-1 -pu l sed of nove l factor human CD4 (+) T-ce 2003 ; 7 7 ( 1 6 ) : 871 9- 8728 Prepub l i shed R , Murakami T et aga i nst R5 i n hu-PBL-SCI dendr of D0 I , Yosh i d a A , Tanaka [0030] i on of D it ic ce l l s :p 11 o r i g i nj o n 2003/07/30 Jou as a に参 照 の こ と 。 遺 伝 子 導 入 細 胞 は 、 RPM は音地 に て 4 日 間 培 養 した (i n v i tro) 。上清 を回 収 し、 ウ ィ ル ス 力 価 を 決 定 した 。 詳 細 は 、 上 記 文 献 4 参 照 。 HIV- 1 ( 1 B) は 、 Mo l t-4/ 111 c e l l l i n e で 作 成 し、 培 養 上 清 は 回 収 して 使 用 した 。 そ の 他 の H I V- 1 は 、 H I V subtype cs, West Br i dgewater, ( 4 ) PBMC i i t y pane l PRD320 (BB I D i agnost i MA, USA) か ら得 た も の で あ る 。 H I V-1 は 、 使 用 す る ま で 、 _80 [0031 ] i nfect °C で 保 存 した 。 ( 末 梢 血 単 核 球 ) の 活 性 化 と H I V-1 の 感 染 健 康 な ドナ ー か ら採 取 さ れ た PBMG ( 末 梢 血 単 核 球 ) を 活 性 化 した 。 詳 細 は 、上 記 文 献 3 参 照 の こ と。 簡単 なスキー ム を図 2 に示す 。 [0032] 以下 、簡 略 に説 明す る。 密度勾配遠心 RPM ( H i stoPAQUE-1 は音地 に 懸 濁 さ せ 077 : S i gma-A I d ( 濃 度 :2 x 10 6c e l I s/ml ) レ コ ー ト した 1ml /we l I の プ レー ト (24we l に BD) 、 0KT3 ( 濃 度 :5 g/ml ) でプ に 分 注 して 、 0 . 1 パ g/ml の 抗 G D28 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 存 在 下 2 4 時 間 培 養 した [0033] に よ っ て 得 られ た PBMG を i ch) (5 % 炭 酸 ガ ス 雰 囲 気 下 ) 活 性 化 PBMG を 回 収 して 一 度 洗 浄 し、 H I V-1 ク ロ ー ン ( 感 染 多 重 度 0 . 005 〜0. 0 1m. 0 . i . ) 又 は一次分離物 ( 細 胞 数 2 x 10 6 に 対 して p24 が 10ng) を 感 染 させ た 2時間 ) 。 次 い で 三 回 洗 浄 し、 20Uml I L-2 を 含 有 す る RPM は音地 に 再 度 懸 濁 さ せ ( 濃度 ( : x 1 0 c e l I s/ml ) l I の プ レ ー ト (48we 、 0 . 5ml /we l に BD) に 分 注 して 、 様 々 な 濃 度 の 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 存 在 又 は 非 存 在 下 及 び コ ン ト ロ ー ル を 培 養 した 。 選 択 実 験 と し て は 、 抗 GD3/GD28 [0034] ml I L-2 抗体 (1 を 感 作 し た 活 性 化 PBMG を 、 20U day) を 含 有 す る RPM は音地 に て 、 A 1 2 0 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 存 在 下 又 は 非 存 在 下 、 24 時 間 培 養 し (濃 度 :1 x 1 0 6 c e l I s/ml ) 、 ; - ケ モ カ イ ン の 量 を E L I SA に よ り定 量 した 。 H I V-1 の 増 殖 は 、 培 養 液 上 清 中 に 生 成 さ れ た H I V-1 core 4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 と の 結 合 を 利 用 した キ ヤ プ チ ャ p24 を 、 抗 H I V - 1 P2 一EL I SA に よ り 定 量 こ と に よ り 同 定 し た 。 な お 、 ス タ ン ダ ー ド と し て 組 換 え 型 H I V-1 ademi - ケ モ カ イ ン に 適 用 す る E L I SA キ ッ トは 、 B i osource く は B i o l egend [0035] ( 5 ) (B i o Ac ¾:使 用 し 二。 a , Canada) ヒ ト P24 蛋 白 (Gamer i I l o) 若 し よ り購 入 し た 。 フ ロ ー サ イ トメ ト リ 一 (F :以 下 、 単 に l o w Cytometry 「FGM 」 と記 す ) 生 細 胞 の FGM 分 析 に つ い て の 詳 細 は 、 上 記 文 献 3 参 照 の こ と 。 以下 、簡 略 に説 明す る。 分 析 を 行 う 細 胞 は 、 2mg/ml の ヒ g Gで F c 受 容 体 を ブ ロ ッ ク し (氷 冷 1 5 分 ) 、 これ ら の 細 胞 の 一 定 量 を 、 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 と 結 合 した 蛍 光 染 料 決 定 した 濃 度 ) で 染 色 した 細 胞 は 、 FAGS 緩 衝 液 (氷 冷 3 0 分 ) 。 (2%FGS と 0 . 1 % ア ジ 化 ナ ト リ ウ ム を 含 む PBS) て 、 FAGS 緩 衝 液 中 の 1 % パ ラ ホ ル ム ア ル デ ヒ ド (以 下 、 単 に で 固 定 し 、 FAGS [0036] (予 め で洗 浄 し 「PFA 」 と 記 す ) を 使 用 して 分 析 した 。 Ga l i bur 得 た 分 析 デ ー タ は 、 Ce l l Quest softwear (BD) で 解 析 した 。 H I V-1 感 染 細 胞 を 検 出 す る た め に 、 細 胞 を 4 %の PFA を 含 む PBS で 固 定 し (室 温 5 分 ) 、 0 . 1 %の サ ポ ニ ン を 含 む FAGS 緩 衝 液 で 洗 浄 し た 。 こ れ ら の 細 胞 は 、 2mg/ml の ヒ こ れ ら の 細 胞 の 一 定 量 を 、 抗 H I V-1 と 結 合 し た A l exa F l uor g Gで F c 受 容 体 を ブ ロ ッ ク し p24 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 488 で 染 色 し た (氷 冷 3 0 分 ) 。 (氷 冷 1 5 分 ) 、 (ク ロ ー ン 2G2) 細 胞 は 、 FAGS 緩 衝 液 で 洗 浄 し、 p24+ 細 胞 の 細 胞 頻 度 分 布 と絶 対 数 を 、 細 胞 計測キ ッ ト ( BD) を使 用 して FGM に よ りマ ニ ュ ア ル に 沿 っ て 計 測 した 。 [0037] ( 6 ) 統計解析 デ ー タ は 、 Pr i s m software (Graph Pad) を使 用 し、 ス チ ュ 一 デ ン トt 検 定 に よ り有 意 差 の 有 無 を解 析 した 。 [0038] 2 . 実 験 及 び結 果 ( 1 ) 活 性 化 PBMG ( — 次 ) へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に 対 す る 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 効 果 研 究 室 で 調 整 した 10 g/ml 抗 GXGR4 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 ( A 1 45 ク ロー ン 、 A 1 20 ク ロー ン A80 ク ロー ン ) の 存 在 下 及 び 非 存 在 下 に お い て 、 抗 GD3/GD28 抗 体 で 活 性 化 した PBMG ( 初 代 培 養 ) へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス ( JR-FL 株 及 び N L4-3 株 ) の 感 染 性 を 分 析 した 。 これ らの PBMG は 、 低 感 染 多 重 度 ( 0 . 005 〜 0 . 0 1 ) で HI V-1 に プ レ感 染 させ て お り、 検 証 す る モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 存 在 下 又 は 非 存 在 下 で 培 養 を 行 った 。 [0039] その結 果 を図 3 に示す 。 図 3 に 示 す よ う に 、 A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 及 び A80 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 は 、 R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス 双 方 の 生 成 (HI V-1 P24) を 顕 著 に 抑 制 した が 、A 1 45 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 大 き な 増 殖 抑 制 効 果 は 認 め られ な か った 。 [0040] (2 ) A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の 更 な る 評 価 上 記 実 験 に お い て 、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の HI V-1 抑 制 効 果 が 、 そ の 他 の モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 中 で 最 も高 か った の で 、 A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の ゥ ィ ル ス 感 染 抑 制 効 果 の 更 な る 評 価 を 行 った 。 HI V-1 株 と して 、 R5 HI V-1 JR- Fし R5 HI V-1 JR- GSF 、X4 HI V-1 NL4— 3、X4 HI V-1 I I I Bを使 用 した 。 [0041 ] その結 果 を図 4 に示す 。 図 4 に 示 す よ う に 、 R5 HI V-1 JR- Fし R5 HI V-1 JR- GSF 、X4 HI V-1 NL4- 3、 X4 HI V-1 I I I B全 て の 株 に お い て 、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 が HI V_1 生 成 抑 制 効 果 を 示 す こ とが 認 め られ た 。 [0042] 関 連 性 の な い複 数 の ドナ 一 由 来 の 活 性 化 PBMG に 対 す る A 1 2 0 モ ノ ク ロ一 ( 3 ) ナ ル 抗 体 の H I V-1 生 成 抑 制 効 果 関 連 性 の な い ドナ 一 由 来 の 活 性 化 PBMG に 対 す る A 1 2 0 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の R 5 H I V-1 6 JR-FL 及 び X4 H I V-1 NL4-3 生 成 及 び 増 殖 抑 制 効 果 を検 証 した 。 例 の ドナ ー か ら採 取 した PBMG は 、 固 定 化 した 0KT-3 と溶 液 状 の 抗 GD28 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 で 予 め 活 性 化 し、 R5 H I V-1 JR-FL 及 び X4 H I V-1 NL4-3 に感 染 させ た ( 感 染 多 重 度 0 . 0 1m . 0 . i ) 。 細 胞 は 洗 浄 後 、 A 1 2 0 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 及 び コ ン トロー ル (rat i sotype) と と も に 4 日間 培 養 した 。 ウ ィ ル ス の 増 殖 は 、 p24 濃 度 、 及 び 1 . ( 5 ) に お い て 記 載 した FGM に よ る 感 染 細 胞 の 頻 度 分 布 に よ り評 価 した 。 [0043] その結 果 を図 5 に示す 。 図 5 に 示 す よ う に 、 R5 H I V-1 JR-FL 及 び X4 H I V-1 NL4-3 生成 及 び増 殖 抑 制 効 果 に は 確 か に ドナ 一 毎 の ば らつ き が あ る が 、 どの ケ ー ス に お い て も 、 A 1 2 0 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 添 加 す る こ と に よ り、 顕 著 な 抑 制 効 果 を 示 す こ とが わ か る。 更 に、図 5 ( b ) に よ る と 、 どの ケ ー ス に お い て も 、 感 染 細 胞 の 頻 度 分 布 が 減 少 して い る こ とか ら、 A 1 2 0 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 感 作 させ る と 、 ウ ィ ル ス の 細 胞 伝 播 が 抑 制 され る こ とが わ か る 。 この よ う に 、 R5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス 双 方 の 感 染 及 び 増 殖 を 抑 制 す る 抗 G XGR4 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 (A1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 ) は 、 現 在 知 られ て い る 限 りに お い て は 初 め て の 知 見 で あ る 。 [0044] ( 4 ) 活 性 化 PBMG で の R5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス 抑 制 効 果 に お け る A 1 2 0 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の 濃 度 依 存 性 X4 ウ ィ ル ス と比 較 して R5 ウ ィ ル ス の 抑 制 効 果 に 違 い が あ る の か 否 か を検 証 した 。 X4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ウ ィ ル ス に 感 染 した 活 性 化 PBMG を 各 濃 度 の A 1 2 0 モ ノ ク 口 ー ナ ル 抗 体 濃 度 存 在 下 で 4 日間 培 養 した 。 培 養 上 清 に お け る HI V-1 感 染 は 、 24 EL I SA に よ り評 価 した 。 [0045] その結 果 を図 6 に示す 。 図 6 に 示 す よ う に 、 最 大 の 抑 制 効 果 を 顕 す A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 濃 度 は 、 R5 ウ ィ ル ス で は 5 〃 g/ml 以 上 で あ り、 X4 ウ ィ ル ス で は 0 . 6 〃 g/ml 以 上 で あ つ た。 しか し、 図 5 の グ ラ フ の 形 状 が 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 に よ る R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ イ ル ス 抑 制 の メ 力 二 ズ ム は 異 な る こ とが 示 唆 され た 。 [0046] ( 5 ) HI V-1 産 生 細 胞 株 及 び HTLV-1 産 生 細 胞 株 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ 一 ナ ル 抗 体 の影響 上 記 の よ うな 結 果 が 得 られ て い る が 、 A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ る ウ ィ ル ス の 感 染 及 び 増 殖 抑 制 は 、 A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 に 混 入 して い た 非 特 異 的 な 阻 害 物 質 の 存 在 に よ り二 次 的 に 引 き起 こ され た も の で は な い 。 これ を 示 す た め に 、 同 濃 度 及 び 同 量 の A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 を HI V-1 産 生 細 胞 株 Mo は- 4/ I I I B及 び HTLV-1 産 生 細 胞 株 MT-2 に 添 加 して 検 証 した 。 HI V-1 産 生 細 胞 株 Mo 11-4/ 1I I B及 び HTLV-1 産 生 細 胞 株 MT-2 は 、 A 20 モ ノ ク ロ — ナ ル 抗 体 (10ug/ml ) 又 は コ ン トロー ル 存 在 下 で 1 日間 培 養 した 。 培 養 上 清 に お け る HI V-1 p24 、 HTLV-1 p24 は EL I SA に よ り評 価 した 。 [0047] その結 果 を図 7 に示す 。 図 7 に 示 す よ う に 、 A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 を 添 加 した こ と に よ る 影 響 は 認 め られ な か った 。 [0048] ( 6 ) 活 性 化 PBMG に お け る A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 に よ る GGR 5 結 合 性 —ケ モ カ イ ン産 生 の 増 加 ヒ トMI P-1 ひ、 ヒ トMI P_1 、 ヒ トRANTES に 対 す る 中 和 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を使 用 し、 これ らの 中 和 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 が R5 ウ ィ ル ス の 感 染 及 び 増 殖 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 効 果 を 逆 転 させ る か 否 か を検 討 した 。 6 例 の ドナ ー か ら採 取 した PBMG は 、 固 定 化 した 0KT-3 と溶 液 状 の 抗 GD28 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 で 予 め 活 性 化 し、 洗 浄 後 、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 及 び コ ン トロー ル ( rat i sotype) で 1 日間 感 作 した 。 培 養 上 清 に お け る ; - ケ モ カ イ ン は EL I SA に よ り評 価 した 。 [0049] その結 果 を図 8 に示す 。 図 8 に 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 媒 介 した R5 ウ ィ ル ス 抑 制 効 果 は 、 抗 MI P-1 ひ モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 及 び 抗 MI P-1 モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ り逆 転 した が 、 抗 RANTES モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ っ て は 逆 転 しな か った 。 [0050] (7 ) A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性 — ケ モ カ イ ン産 生 の 誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 と GXGR4 の 結 合 に よ っ て 、 MI P-1 ES が 生 成 す る の か 否 か を確 認 す る た め 、 ひ 、 MI P_1 、 RANT 1 日A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 感 作 した 培 養 液 の 上 清 中 の ケ モ カ イ ン濃 度 を 測 定 した 。 [0051 ] その結 果 を図 9 乃 至 図 1 1 に示す 。 図 9 に 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 存 在 下 で 培 養 した 抗 GD3/GD28 活 性 化 PBMG は 、 全 て の ドナ 一 に お い て 、 MI P-1 ひ 及 び MI P-1 の 生 成 量 を顕 著 に 増 加 させ た 。 な お 、 RANTES に お い て は 、 半 数 の ドナ ー で 増 加 が 認 め られ た 。 [0052] ま た 、 図 1 0 に 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 が 存 在 す る 培 地 の 活 性 化 PBMG は 、 GGR5+ 細 胞 頻 度 及 び GD4+T 細 胞 の 表 面 で の GGR5 発 現 平 均 密 度 を 顕 著 に 低 下 させ る 。 逆 に 、 GD4+T 細 胞 に よ っ て 発 現 す る GXGR4 の 平 均 密 度 は 僅 か に 増 加 す る 。 な お 、 これ は 、 同 じPBMG 培 養 に お い て A 1 45 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 ( A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 と は 交 差 反 応 を起 こ さ な い ) を使 用 して 検 出 した 。 [0053] 更 に 、 図 1 1 に 示 す 通 り、 活 性 化 PBMG が A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 と と も に ィ ンキ ュベ 一 トされ る こ と に よ り引 き起 こ され る GGR5 発 現 の 低 下 は 、 Ml P-1 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 及 び 抗 Ml P-1 モ ノ り ひ ロー ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ り逆 転 す る 力、 抗 RANTES モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 添 加 に よ っ て は 逆 転 しな い 。 以 上 の よ う に 、 これ らの 結 果 に よ り、 抗 GD3/GD28 活 性 化 PBMG を A 1 20 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 と と も に イ ン キ ュ ベ 一 卜す る こ と に よ り、 X4 ウ ィ ル ス 及 び R5 ゥ ィ ル ス 双 方 の 感 染 が 抑 制 され る こ とが わ か る 。 これ は 、 X4 ウ ィ ル ス に 対 して は GXGR4 を ブ ロ ッ ク す る こ と に よ りも た ら され る 作 用 で あ り、 R5 ウ ィ ル ス に 対 して は MI P-1 ひ及 び MI P-1 の よ うな GGR5 結 合 性 β - ケ モ カ イ ン の 合 成 に よ る と こ ろ で あ る と示 唆 され る 。 [0054] (8 ) Τ 細 胞 と単 核 球 に お け る Α120 モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 の 刺 激 に よ る ; - ケ モ 力 イ ン産生 Α120 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 存 在 下 で の 活 性 化 PBMG の イ ン キ ュ ベ 一 卜に 伴 い _ ケ モ カ イ ン の 合 成 を 行 う細 胞 を 同 定 す る た め に 、 細 胞 除 去 実 験 を 行 った 。 一 定 分 量 の 抗 GD3/GD28 活 性 化 PBMG か ら、 適 切 な 系 列 特 異 的 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を 抱 合 した 免 疫 ビー ズ を使 用 して GD1 9+B 細 胞 、 GD4+T 細 胞 、 GD8+T 細 胞 、 G D 1 4+単 核 球 を 除 去 した 。 除 去 処 理 を行 わ な い もの ( mock) Gを 10 と各 々 の 細 胞 除 去 処 理 を 行 った 活 性 化 PBM g/ml の A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 存 在 下 及 び 非 存 在 下 で 培 養 した 。 24 時 間 後 、 培 養 液 上 清 中 の ケ モ カ イ ン を EL I SA に よ り定 量 した 。 [0055] その結 果 を図 1 2 に示す 。 図 1 2 に 示 す 通 り、 GD1 4+単 核 球 を 除 去 した 場 合 に 、 ;- ケ モ カ イ ン の 合 成 が 最 も顕 著 に 減 少 し、 次 い で 、 GD4+T 細 胞 及 び GD8+T 細 胞 を 除 去 した 場 合 に 、 - ケ モ カ イ ン の 合 成 が 減 少 す る傾 向 が あ った 。 しか しな が ら、 GD1 9+B 細 胞 を 欠 損 させ た 場 合 の ; - ケ モ カ イ ン の 合 成 は 、 最 も減 少 しな か った 。 これ らの 結 果 は 、 単 核 球 と と も に 活 性 化 T細 胞 が 、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 に 応 答 して 、 ;- ケ モ カ イ ン を 分 泌 して い た こ と を 示 唆 して い る 。 [0056] ( 9 ) 様 々 な HI V- 1 株 種 に 対 す る A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 感 染 抑 制 効 果 A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 抑 制 範 囲 を検 証 した 。 一 定 分 量 の 抗 GD3/GD28 活 性 化 PBMG を 15種 類 の 異 な つた HI V-1 株 に 感 染 させ 、 10 〃g/ml の A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 存 在 下 若 し くは コ ン トロー ル と して の I g G の 存 在 下 培 養 を 行 った 。 そ して 、 感 染 5 日後 、 上 清 中 の p24 濃 度 を 定 量 した 。 [0057] 結 果 を図 1 3 に示す 。 図 1 3 に 示 す 通 り、 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 存 在 下 培 養 した も の は 、 10種 の R5 ウ ィ ル ス 株 、 3種 の X4 ウ ィ ル ス 株 、 2種 の R5/X4 両 指 向 性 ウ ィ ル ス 株 全 て に お し、て 一 様 に p24 の 濃 度 減 少 が 認 め られ た 。 [0058] ( 1 0 ) そ の 他 の 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 の 評 価 12 G 5 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 7 1 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 72 モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 、 MAB1 73 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 に よ る 抑 制 効 果 を 図 1 4 及 び 図 1 5 に 示す 。 な お 、 実 験 方 法 及 び 評 価 方 法 等 は 、 上 記 「 (1 ) 活 性 化 PBMG ( — 次 ) へ の R 5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス の 感 染 に 対 す る 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 の 効 果 」 の 項 及 び 「 (7 ) A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 添 加 に よ る GGR 5 結 合 性 —ケ モ カ イ ン産 生 の 誘 導 と GGR 発 現 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ョン 」 の 項 と 同 様 で あ る ま た 、 12 G 5 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 EGL1 及 び EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 し、 MAB1 7 1 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 72 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 73 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 す る 。 [0059] 図 1 4 MAB1 7 1 モ ( a ) 及び図 1 4 ( b ) に 示 す よ う に 、 12 G 5 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 72 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 MAB1 73 モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 、 全 て に お い て 、 R5 ウ ィ ル ス 及 び X4 ウ ィ ル ス の 増 殖 が 抑 制 され る こ とが わ か る 。 更 に 、 図 1 5 に 示 す よ う に 、 MAB1 73 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の 感 作 に よ っ て 、 A 120 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 感 作 時 と 同 様 に 、 GGR 5 結 合 性 — ケ モ カ イ ン で あ るM I P-1 ひ産 生 が 誘 導 され て い る こ とが わ か り、 GGR5 受 容 体 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ヨン が 起 こ っ て い る こ とが わ か る 。 つ ま り、 これ らの 結 果 に よ り、 EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 す る モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 も ま た 、 X4 ウ ィ ル ス の み な らず R5 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 害 す る こ とが わ か る 。 [0060] 以 上 の よ う に 、 本 件 に お い て は 、 EGL3 を 有 す る ェ ピ ト一 プ と結 合 す る ラ ッ ト抗 ヒ トGXGR4 A80 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 、 EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 す る マ ウ ス 抗 ヒ トGXGR4 MB1 73 (MB1 7 1 及 び MB1 72) モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 が R5 ウ ィ ル ス 株 及 び X4 ウ ィ ル ス 株 双 方 の 活 性 化 PBMG へ の 感 染 を 阻 害 す る こ とが わ か った そ して 、 特 に 、 EGL1 及 び EGL2 を 有 す る ェ ピ トー プ と結 合 す る ラ ッ ト抗 ヒ トG XCR4 A 1 20 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 は 、 R5 ウ ィ ル ス 株 及 び X4 ウ ィ ル ス 株 双 方 の 活 性 化 PBMG へ の 感 染 を 顕 著 に 阻 害 す る こ とが わ か った 。 この メカニズ ム の模 式 図 を図 1 6 に示す 。 X4 ウ ィ ル ス 株 の 感 染 抑 制 に 関 して は 、 A 1 20 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 及 び 他 の EGL 2領 域 に 反 応 す る 抗 体 は 、 X4 ウ ィ ル ス が GXGR4 に 結 合 す る こ と を 直 接 的 に 妨 害 す る。 つ ま り、 A 1 20 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 及 び 他 の EGL2 領 域 に 反 応 す る 抗 体 自 らが G XGR4 受 容 体 に 結 合 して 、 X4 ウ ィ ル ス が GXGR4 に 結 合 す る こ と を 阻 止 す る 。 ま た 、 R5 ウ ィ ル ス 株 の 感 染 抑 制 に 関 して は 、 主 と して 、 A 1 20 モ ノ ク ロ一 ナ ル 抗 体 及 び 他 の EGL2 領 域 に 反 応 す る 抗 体 の 刺 激 に よ りGGR5 結 合 性 - ケモカ イン ( 特 に 、 MI P-1 ひ) の 産 生 が 促 され る こ と に よ っ て GGR5 受 容 体 の ダ ウ ン モ デ ュ レー シ ヨン が 起 こ り、 R5 ウ ィ ル ス が 感 染 す る こ とが 阻 止 され る 。 この よ う に 、 本 発 明 に 係 る GXG ケ モ カ イ ン 受 容 体 抗 体 で あ る A 1 20 抗 体 ( Ant i -CXCR4 EGL 1&2 抗 体 ) 等 は 、 X4 ウ ィ ル ス の み な らず R5 ウ ィ ル ス へ の 感 染 を も 阻 害 す る も の で あ り、 今 後 、 臨 床 的 な 利 用 を も期 待 され る も の で あ る と と も に 、 A I DS 撲 滅 の 一 助 と な る こ とが 大 き く期 待 され る も の で あ る 。 請 求 の範 囲 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の 標 的 細 胞 〜 の 感 染 を 阻 害 す る 阻 害 物 質 で あ つて 、 該 阻 害 物 質 は 、前 記 標 的細 胞 に発 現 す る ひ - ケ モ カ イ ン受容 体 に対 して 結 合 特 異 性 を 有 す る モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 で あ る こ と を 特 徴 とす る ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 。 前記 ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ り、 前 記 阻 害 物 質 で あ る前 記 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 で あ る こ と を 特 徴 とす る 請 求 項 1 に 記 載 の ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 。 前 記 阻 害 物 質 は 、 前 記 ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス の う ち 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ; - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HIV - R5 ウ ィ ル ス 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 X4 ウ ィ ル ス 、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ; - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 及 び ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 の 双 方 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 R5X4 ウ ィ ル ス 、 全 て の 感 染 を 阻 害 す る こ と を 特 徴 とす る 請 求 項 1 又 は 請 求 項 2 に 記 載 の ヒ ト免 疫 不 全 ゥ ィル ス 感 染 阻害物 質 。 前記 ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ る と と も に 、 前 記 阻 害 物 質 で あ る前 記 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 で あ り、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 前 記 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ 突 出 して い る前 記 GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 少 な く と も 第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 、 若 し くは 、 第 3 ル ー プ ドメ イ ン を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ る こ と を 特 徴 とす る 請 求 項 1 又 は 請 求 項 2 に 記 載 の ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害 物 質 。 前記 ひ - ケ モ カ イ ン 受 容 体 は GXGR4 で あ る と と も に 、 前 記 阻 害 物 質 で あ る前 記 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 は 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 で あ り、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 は 、 前 記 標 的 細 胞 表 面 よ り外 側 へ 突 出 して い る前 記 GXGR4 の 複 数 の ル ー プ ドメ イ ン の う ち 、 少 な く と も 第 1 ル ー プ ドメ イ ン及 び 第 2 ル ー プ ドメ イ ン の 一 方 を 有 す る 三 次 元 ェ ピ トー プ を 認 識 す る 抗 体 で あ り、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク 口 一 ナ ル 抗 体 は 、 前 記 GXGR4 に 結 合 す る こ と に よ り、 前 記 標 的 細 胞 に 発 現 す る ひ- ケ モ カ イ ン 受 容 体 GXGR4 を補 助 受 容 体 と して 利 用 す る HI V-1 X4 ウ ィ ル ス の 前 記 GXGR4 へ の 結 合 を 阻 害 す る こ と に よ り、 前 記 HI V-1 X4 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る と と も に 、 前 記 抗 GXGR4 モ ノ ク 口一 ナ ル 抗 体 の 前 記 GXGR4 へ の 結 合 に よ り誘 起 され る 記 標 的細 胞 に発 現 す る シ ヨン され た 結 果 、 前 記 _ ケ モ カ イ ン に よ り、 前 - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 が ダ ウ ン モ デ ュ レー - ケ モ カ イ ン 受 容 体 GGR5 を補 助 受 容 体 と し て 利 用 す る HI V-1 R5 ウ ィ ル ス の 感 染 を 阻 止 す る こ と を 特 徴 とす る 請 求 項 1 乃 至 請 求 項 3 い ず れ か 一 項 に 記 載 の ヒ ト免 疫 不 全 ウ ィ ル ス 感 染 阻 害物質。 INTERNATIONAL A. CLASSIFICATION C 0 7K1 6/28 International application No. SEARCH REPORT I PCT / JP2 0 1 1 / 0 6 2 0 0 7 OF SUBJECT MATTER (2 0 0 6 . 0 1 ) i , C 1 2P21 / 0 8 (2 0 0 1 ) According to International Patent Classification (IPC) or to both national classification and IPC B. FIELDS SEARCHED Minimum documentation searched (classification system followed by classification symbols) C07K1 6/ 2 8 , C1 2 P2 1 / 0 8 Documentation searched other than minimum documentation to the extent that such documents are included in the fields searched Jitsuyo Kokai Shinan Koho Jitsuyo 1922-1 Shinan Koho 996 Jitsuyo 1 971-2011 Shinan Toroku Jitsuyo Toroku Koho 1996-2011 Shinan Koho 1994-2011 Electronic data base consulted during the international search (name of data base and, where practicable, search terms used) CA/ B I 〇S I S /MEDLINE /WPI DS (STN ) , JST Plus / JMEDPlus / JST 7 8 0 ( JDreaml l ) DOCUMENTS CONSIDERED TO BE RELEVANT C. Category* Citation of document, with indication, where appropriate, of the relevant passages X/ Y K , recogni CXCR4 R . , e t a l . , z i ng the thi i nduce enhance s on . , que monoclonal extracel l ymphocyte human 1 -mediated i nfecti s Uni r d immunode f syncyt ium J . V i r o l . , antibody lular loop aggluti nati ciency v i r u s f o rmati on and 2 00 1 . 12 , Relevant to claim No. on -5 / 1 - 5 o f and type product Vo l . 75 , ive No . 2 3 , p . 1 15 3 4- 1 15 43 X/ Y CARNEC ant , X . , ibodie d i f f e r s s i nhibit type gni ent 1 . , J . e t a l . , r e cogni f i cantl r y o f V i rol Ant z ing y i n human . , i -CXCR4 ove monoclonal r l appi thei r abi immunode 2 005 . 02 , f Vol -5 / 1 - 5 ng epi tope l t y t o ciency . 7 9 , s v i r u s No . 3 , p . 1 93 0- 1 933 See patent family annex. Further documents are listed in the continuation of Box C . * "A Special categories of cited documents: document defining the general state of the art which i s not considered to be of particular relevance " later document published after the international filing date or priority date and not in conflict with the application but cited to understand the principle or theory underlying tiie invention "E earlier application or patent but published on or after the international filing date "X" L document which may throw doubts on priority claim(s) or which i s cited t o establish the publication date of another citation or other special reason (as specified) document of particular relevance; the claimed invention cannot be considered novel or cannot b e considered t o involve an inventive step when the document i s taken alone "Y" document of particular relevance; the claimed invention cannot be considered t o involve an inventive step when the document i s combined with one or more other such documents, such combination being obvious to a person skilled in the art "&" document member of the same patent family "O" document referring t o an oral disclosure, use, exhibnion or other means "P" t o the international filing date but later than Date of the actual completion of the international search 02 Augu st , 2 0 11 (02 . 0 8 . 11 ) Name and mailing address of the ISA/ Japane s e Patent Date of mailing of the international search report 0 9 Augu Authorized officer Of f i c e Facsimile No. Form PCT/ISA/210 (second sheet) (July 2009) Telephone No. st , 2 0 11 (0 9 . 0 8 . 11 ) INTERNATIONAL SEARCH REPORT International application No. PCT / JP2 0 1 1 / 0 6 2 0 0 7 C (Continuation). Category* A DOCUMENTS CONSIDERED TO B E RELEVANT Citation of document, with indication, where appropriate, of the relevant passages Yuet s u TANAKA , " H I V Kans e n Z o sho k u o Yokus e i suru Futat s u n o Hoho : J u o Saibo Vacci n e t o 0 X 0 Shigeki , The Journal o f A I DS Re s earch , 2 0 November 2 0 1 0 ( 2 0 . 1 1 . 2 0 1 0 ) , vol . 1 2 , n o . 4 , page 3 0 5 , SY1 0 - 1 ) Form PCT/ISA/2 10 (continuation of second sheet) (July 2009) Relevant to claim No. 1- 5 国際出願番号 国際調査報告 発明の属す る分野の分類 ( 国際特許分類 (I A . Int .Cl . C07K16/28 (2006. 01) i , C12P21/08 調査 を行った分野 B . 調査を行った最小限資料 ( 国際特許分類 (I Int .Cl . C07K16/28, J P 2 0 1 1 / P C T 0 6 2 0 0 7 P C ) ) (2006. 01) n P C ) ) C12P21/08 最小限資料以外の資料で調査 を行った分野に含まれ るもの 日本国実用新案公報 日本国公開実用新案公報 日本国実用新案登録公報 日本国登録実用新案公報 1 9 2 2 — 1 9 9 6 1 9 7 1 — 2 0 1 1 1 9 9 6 — 2 0 1 1 1 9 9 4 2 0 1 1 年 年 年 年 国際調査で使用 した電子データベ ー ス ( データベ ー ス の 名称、調査に使用 した用語) (STN) , JSTPlus/JMEDPlus/JST7580 CA/BIOSIS/MEDLINE/WPIDS (JDreamll) 関連す ると認め られ る文献 引用文献の カテゴリ一 水 引用文献名 及び一部の箇所が関連す るときは、その関連す る箇所の表示 C . X / Y AN A , R., et al., Unique extracellular loop of monoclonal CXCR4 enhances human formation and productive antibodv induces immunodeficiency lymphocyte virus infection., recognizing type J . Virol., the third agglutination 1-mediated 関連す る 請求項 の 番号 1 - 5 / 1 - 5 and syncytium 2001 . 12, Vol.75, No. 3, p .11534- 11543 X / CARNEC, Y X., overlapping human et al., Anti-CXCR4 monoclonal epitopes differ significantly immunodeficiency virus i n their ability type 1 ., . Virol., c 欄の続きにも文献が列挙 されている。 * 引用文献のカテ ゴリー 」特に関連のある文献ではなく、一般的技術水準を示す もの ΓΕ 」国際出願 日前の出願 または特許であるが、国際出願 日 以後に公表 されたもの 「 L 」優先権主張に疑義を提起す る文献又は他の文献の発行 日若 しくは他 の特別 な理 由を確立す るために引用す る文献 ( 理 由を付す) Γθ 」 口頭による開示、使用、展示等に言及す る文献 「 Ρ 」国際出願 日前で、かつ優先権の主張の基礎 となる出願 0 2 . 0 8 . 1- 5/ 1- 5 entry of 2005.02, Vol.79, No. 3, の 日の後に公表 された文献 「 T 」国際出願 日又は優先 日後に公表 された文献であって 出願 と矛盾す るもの で はなく、発明の原理又は理論 の理解のために引用す るもの 「 X 」特に関連のある文献であって、当該文献のみで発明 の新規性又は進歩性がない と考えられ るもの ΓΥ 」特に関連のある文献であって、当該文献 と他の 1 以 上の文献 との、当業者 にとって 自明である組合せ に よって進歩性がない と考えられ るもの Γ& 」同一パ テ ン トファミリー文献 2 0 1 1 0 9 . 2 1 0 (第 2 ページ) (2 0 8 . 特許庁審査官 ( 権限のある職員) 国際調査機 関の名称及びあて先 日本国特許庁 (I S A J Ρ ) 郵便番号 1 0 0 — 8 9 1 5 東京都千代 田区霞が関三丁 目4 番 3 号 l S A t o mnibit 国際調査報告の発送 日 国際調査を完了 した 日 C T recognizing パ テ ン トフ ァ ミ リー に関す る別紙 を参照。 ΓΑ 様式 P antibodies 長谷川 電話番号 0 0 9 年 7 月) 2 0 1 4 Β 4 8 6 7 茜 0 3 — 3 5 8 1 — 1 1 0 1 内線 3 4 4 8 国 際調 査 報 告 C (続 き) . 国 際 出願 番 号 P C P 2 0 関連 す る と認 め られ る文 献 引用 文 献 の カ テ ゴ リー * 引用 文 献 名 及 び一 部 の箇 所 が 関連 す る とき は 、 そ の 関連 す る箇 所 の表 示 p.1930-1933 A 田中勇 悦 , HIV 感 染 増殖 を抑 制す る 二 つ の 方 法 : 樹 状 細 胞 ワ ク チ ン と 0X40 刺 激 , 日本 エ イ ズ学会誌 , 2010. 1 1. 0, Vol. 12, No. 4 , p . 305, 様式 P C T 0 6 2 0 0 7 I SA 2 1 0 (第 2 ペ ー ジ の 続 き) (2 0 0 9 年 7 月) SY10- 1) 関連 す る 請 求 項 の番 号