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日消外会誌 29(3):691∼ 698,1996年
肝線維化率か らみた硬変肝切除後の肝再生能に関する実験的研究
福 島県立医科大学第 2外 科
畠山 優 一
小 野 俊 之
阿 部 力 哉
肝硬変合併肝細胞癌 の肝切 除 に関 して は肝再 生能 の評価 も必要 と考 える。今 回,TGF,β の発現像 で
あ る肝線維化 に注 目 し,そ の程度 を半定量 的 に求 め る肝線維化率 が硬変肝切 除後 の肝再生能 の術前予
測 に有 用か を検討 した。Wistar系 雄性 ラ ッ トにチオ ア セ タ マ イ ドを投与 して肝 硬変 ラ ッ トを作 製 し
た。他 ラ ッ トには生食 のみ を投与 した。これ らに2/3肝部分切除 を施行 して切 除肝 の標 本 にアザ ン染色
を行 い,自 動画像解析装置 によ り肝線維化率 を求 めた。 一 方,肝 切24あ るい は48時間後 に屠 殺 し,残
肝標本 よ り BrdU標 識率 を求 め肝 再生能 の指標 とした。 こうして得 た肝線維化率 と Brdu標 識率 との
関係 を検討 す る と全 ラ ッ トを対 象 に して も(おのおの r=-0.64,-0.60),肝
硬変 ラ ッ トのみ を対 象 に
して も (おのおの r=-050,-0.53),肝
線維化率 と Brdu標 識 率 との 間 に は有 意 な 負 の相 関 (p<
005)が 認 め られ ,肝 線維化率 の測 定 は硬変肝切 除後 の肝再生能 の評 価 に有用 と考 え られた。
Key words:
hepatic fibrosis, liver resection,liver cirrhosis, hepatic regenerationactivity, automated
image analysis
I . 結
言
肝細胞癌 は各 種 治療法 の 開発 に よ り生存率の向上が
得 られて きて い る。各種 の治療法 の 中で も肝切 除術 は,
最 も根治性 の期 待 され る治療法 で あ る。現在 は多 くの
と考 え られ る,
著者 は硬変肝切 除後 の肝再生能 の予測 に有用 な種 々
の 因 子 の 1つ と して transforming grOwth factor‐
β
(以下,TGF β )の発現像 と考 え られ る肝線 維化 に注 目
施設 で肝細胞癌 のみな らず転 移性肝癌 に対 して も肝切
し,肝 線維化率が硬変肝切 除後 の肝再生能 の術前予測
除術 が行 われてい るが,肝 切 除後 の肝不全 の発症 は臨
に有用 で あ るか を検討 す ることを 目的 とした。肝線維
床上極 めて重要 な問題 で ある。 これ は本邦 の肝細胞 癌
化率 は自動画 像解析装置 を用 いて半定量 的 に客観 的 に
の約 90%が 慢性肝 炎や肝硬変 な どの慢性肝疾 患 を合併
し,肝 機能 障害 を有 してい る1)2)こ
とに起 因 して い る。
そのため特 に硬変肝 の切 除 の際 には全身的 な耐術能 に
測定 した。
加 え,術 後肝不全 の防止 のた め術前 に慎 重 な肝 機能 の
検討 が必 要 で ある.
現在,い くつかの施設 よ り独 自の肝臓 の耐術能 の評
価法 が報告 され て い る31-O。これ らの 多 くは肝臓 の機
能 的予備力 を見 る もので,術 後早期 の肝臓 の耐術 能 の
評価 が 中心 になってい る。 当科 で も硬変 肝切除 の際 に
は,報 告 されてい る評価法 の い くつか を参考 に して術
H.材 料 お よび方法
1.実 験動物
実 験 に は4 0 匹の 5 週 齢 の W も t a r 系雄 性 ラ ッ ト
(Japan sLC,Inc。 )を 用 いた。
2.実 験動物 の飼育
ラ ッ トは附属研 究所 実験動物研 究室 において, 7時
よ り19時 まで の12時 間 の照 明,室 温 22±1_5°
C,湿 度
55±5%の もとで飼 育 した。餌 はマ ウス ・ラ ッ ト固形飼
料 CE-2(日 本 ク レア株式会社)を 用 い,自 由摂水 ・
摂
前 の肝機能 の評価 を行 って,以 前 よ りも術 後肝不全 の
発生 は減少 した一 方で,術 後早期 に耐術 して も肝再生
食 とした。
能 の不 良 に よる肝 不 全 で在 院死 す る症 例 も認 め られ
る。 そ こで硬変肝 の切 除 に際 して は術前 の肝臓 の耐術
上言
己の ラ ッ トの うち30匹 に対 して, 4%チ オアセ タ
マ イ ド200mg/kgを 週 3回 ,10週 間,ip投 与 して肝硬
能 の評価 として,肝 再生能 の評価 も加 える必要が あ る
変 ラ ッ トを作成 した。 また10匹 には生理 的食塩水 (生
<1995年 11月15日受理>別 刷請求先 :畠 山 優 一
〒96012 福 島市光が丘 1 福 島県立医科大学第 2外
科
3.肝 硬変 ラ ッ トの作成
食)の み を投与 し対照群 とした.
4.肝 部分切除手術
チオアセ タマ イ ドあ るい は生食 の投与 を終 えた ラ ッ
肝線維化率 か らみた硬変肝切除後 の肝再生能
32(692)
卜にネ ンブ ター ル麻酔 を した後 ,開 腹 して Higginsら
の方 法 のに従 って2/3肝部分切 除術 を施行 した。
チ オ アセ タ マ イ ド投 与 群 で は投 与 後 10週 目 に 3匹
が,手 術直後 に 1匹 が死亡 した。生食投与群 で は手術
後 に 1匹 が死亡 した。 そのため以下 の検討 は,チ オ ア
セ タマ イ ド投与 ラ ッ ト26匹 と生 食投与 ラ ッ ト9匹 につ
いて行 った。
5.肝 線維化率 の測定
① 組織染色
摘 出 した切 除肝 は重量 を測定 した後,20%ホ ルマ リ
ンに固定 しパ ラ フ ィ ンに包埋 した。包埋 した切除肝 の
左外側葉 よ り3μ厚 の切 片 を作成 し H.E染 色 お よびア
日消外会誌 29巻
3号
卜13匹 と生 食投与 ラ ッ ト5匹 を,48時 間後 にそれ ぞれ
13匹 と 4匹 を大量 ネ ンブター ル注入 に よ り屠殺 した。
屠殺 の 1時 間 前 にブ ロモ デ オ キ シ ウ リジ ン (以下,
BrdU)50mg/kgを
腹腔 内 に投与 した。屠殺後 ,残 肝 を
摘 出 し重 量 を測 定 した後 に70%ア ル コー ル にて 固定
し,パ ラフ ィ ンに包埋 した。残肝 の うち右外側葉 よ り
3μ厚 の切 片 を作成 し,抗 Brdu単 ク ロー ン抗体 による
免疫組織染色 を行 った。 すなわ ちキシ レン,エ タノー
ル による脱 パ ラフィン後,0.3%H202メ タノー ル に よ
る内因性 ペ ル オ キ シダー ゼ ブ ロ ック を行 い,0.lN塩
酸 に60分 間浸漬 す る こ とに よ リー
重鎖変成処理 を施 行 した。0.lM醐 酸 ソー ダ に よ り中
酸 に30分 間,2N塩
病理組織学的像 を確認 した。
和 した後 ,抗 Brduマ ウス単 ク ロー ン抗体 (DAKO社 ,
20倍希釈)を 用 い て切 片 で 4°Cの もと一 晩,抗 原抗体
アザ ン染色 は朝 隈 によ り報告 されてい るアザ ン染色
法 の変 法的に準 じて施 行 した。す なわ ちキ シ レンお よ
反応 を行 った。 その後 ビオチ ン標識抗 マ ウス免疫 グ ロ
ブ リン・
C下 60分
兎抗体 (DAKO社 ,300倍 希釈 )を 37°
び エ タ ノー ル に よ る脱 パ ラ フ ィン を行 い,渡 辺 の 考
案 りした10%重 ク ロム酸 カ リウム水溶 液 と10%ト リク
問反応 させた後,ア ル カ リフォス フ ァター ゼ標識 ス ト
レプ トア ビジ ン (DAKO社 )を37°
C下 60分間反応 させ,
ロロ酢酸水溶液 の等量混合液 で ある媒染剤 に15分間浸
漬 した後 ,オ ンン ジ G水 溶液 に 5分 間,ア ゾカル ミン
hydrochlolide(DAB)を
ザ ン染色 を行 った。 HE染
色 で はそれ ぞれの硬変肝 の
G水 溶液 に15分間浸漬 して核 ,細 胞 質 な どの実質 を染
色 した。続 いて リンタ ングステ ン酸水溶液 に 5分 間浸
漬 す るこ とに よ り分別 を行 い,ア ニ リン青水溶液 に15
分 間浸漬 して膠 原線維 を主体 とした問質 を染色 した。
さ らに発色 基質 として3,3'diaminobenzidine,tetra
用 い,S―ABC法
に よる免疫
染 色 を 行 った。 な お,対 比 核 染 色 に は Mayer's
Hematoxylinを 用 い た.免 疫 染 色 され た 標 本 に て
2,000個以上 の肝 細 胞 を数 え,そ の 中 に 占 め る BrdU
標識細胞 の割合 を求 め BrdU標 識率 とした。
7.肝 線維化率 と Brdu標 識率
C
o
l
o
r
l
m
a
g
e
P
r
o
c
e
s
s
o
r
s
チオア セ タマ イ ドお よび生 食 を投与 した ラ ッ トの全
自動 画 像 解 析 装 置 は
SPICCA II(日 才ミAvionics社 ), PC‐9801FS(NEC)
例 と,H.E染 色 によ り病理組織学 的 に肝硬変 と診 断 し
ヨン ピュー ター お よび Image COmmand 5098(日
た ラ ッ トにつ いて,切 除肝 の肝線維化率 と肝切 24時 間
本
② 自動画像解析
Avionics社 )ソ フ トウエ アを使用 した。
お よび肝 切 48時 間後 の 残 肝 の BrdU標 識 率 との 関係
肝線維化率 の測定 は次 の通 り行 った。 まず アザ ン染
色 した標本 を顕微鏡下 に,観 察 してい る視野 をノー マ
を検討 した.
8.統 計学 的検 討
ル入力 とコン トラス トを出すた めの積分入力 によ り画
統計学的検 討 は PC-9821As(NEC)コ
ンピュー ター,
像解析装置 の画面 に取 り込 み を行 った.次 に 「
色彩抽
1い
出法」 に よ り画面 を見 なが らア ニ リ ン青 で 青 紫色 に
染色 されて い る部位 を指定 して,コ ンピュー ター に選
SPSS forヽ Vindows(SPSS Japan lnc。
)ソ フ トウエ
検定 によ り,ま た 2群 間 の相 関関係 は Spearmanの 相
択 した色 を記憶 させ て選択色 の部位 と非選択色 の部位
関関係 を求 めて検 討 した。検 定 に際 して は p<0.05を
に二 値化処理 (以下,binalization)を行 った。取 り込
もって有意 とした。
んだ視野全体 にお ける選択色 の 占め る面 積 の割合 (線
維化率 (%)=選 択色 の 占 める面 積 ■取 り込 んだ視野全
体 の面積 X100)を 求 めた。 それ ぞれ 5視 野 を検討 し,
その平均 を肝線維化 率 とした。
6.BrdU標
識率 の測定
BrdU標 識率 は次の通 り測定 し,肝 再生能 の指標 と
した。肝切除 の24時 間後 にチオアセ タマ イ ド投与 ラ ッ
ア を用 い て行 った。 2群 間 の平均 値 の差 は Student t
なお,本 実験 は福 島県立医科大学動物実験委員会 の
承認 を得 て行 った。
II正
.結
果
1.切 除肝 の病理組織学的所見
ラ ッ トの正常肝 で は ヒ トの正 常肝 に比 較 して,小 葉
問組織 で は小 葉 間動脈,小 葉間門脈 ,小 葉 間胆管 を認
め るのみで小 葉 問結合組織 は 目立 たず小葉が密 になっ
1 9 9 6 年3 月
33(693)
て組 織 を構 築 して い た. チ オ アセ タ マ イ ドの 投 与 を
一 に
識 肝 細 胞 は偽 小 葉 内 で 不 均
分 布 して い た ( F i g .
行 った ラ ッ トの 肝 臓 で は,や や 大 小 不 同 の あ る
mu比 1lobular様の 偽 小 葉 に よ る小 葉 の 改 築 が 認 め ら
4b).
れ,そ れ を囲む ように偽小葉 問組織, と くに線維成分
の増生 が起 こってお り長与 の乙型 の肝硬変 像 を呈 した
生 食 投 与 群 の肝 切 2 4 時 間 後 の B r d U 標 識 率 は最 低
Fig. l MicroscOpic feature of the liver in rats
ith intraperitoneal administration of
treated 、′
(Fig. 1).
thioacetanlide Liver cirrhosis is shown on the
2,切 除肝 の肝線維化率
t i s s t l e ( H E s t a i n i n 1g 0, )×
アザ ン染色 を行 う ことに よ り組織 中 の膠 原線維 は青
紫色 に,細 網線維 は淡 青色 に染色 された。 一 方,核 は
赤色 に,細 胞質 は淡 赤色 に染色 された。こ れ に よ り組
織 は間質 の領域 は青色系 に,実 質 は赤色 系 に明瞭 に区
別 す る ことがで き,正 常肝 と硬変肝 を容易 に区別 す る
のみな らず,間 質 の領域 を自動画像解析装置 に よ り認
識 で きた (Fig.2a,b,c).こ
れ に よ り測定 した肝線
維 化 率 は,チ オ アセ タ マ イ ド投 与 の ラ ッ トで は最 低
436%,最
高 3561%を 示 し平 均 1704± 764%で あっ
一
た。 方,生 食 を投与 した ラ ッ トで は最低021%,最
高0,70%で 平均0_51±0.16%で あった.チ オアセ タマ
イ ド投与群 で は生 食投与群 に比 べ有意 に肝線維化率 は
高値 を示 した (p<0.001)(Fig。 3).
3.残 肝 の BrdUの 取 り込 み
BrdU標 識細胞 は,核 内が免疫組織 染色 で茶色 を呈
す る ことに よ り確認 す る ことがで きた。生食 を投与 し
た ラ ッ トの残肝 で は,BrdU標
識細胞 は肝 小実 の周辺
に多 く,中 心 に少 ない傾 向が あった (Fig.4a).チ
アセ タマ イ ドを投与 した ラ ッ トの残肝 で は,BrdU標
Fig. 2
ォ
ユ
燕￨
Automated image analysis of hepatic fibrosis index on
a: Input, b: Binalization, c: Calculation of hepatic fibrosis index
肝線維化率か らみた硬変肝切除後 の肝再生能
34(694)
均45.39±11.42%で あ り,
28.77%,最 高 5361%,平
肝 切48時間 後 で は 最 低 11.13%,最 高 16.60%,平 均
13.74±2.26%で あった。一 方,チ オアセ タマ イ ドの投
与群 の肝切 24時間後 の BrdU標 識率 は最低 7.92%,最
064(p=0.003),肝
日消外会誌 29巻
3号
切48時間後 で は r=-0,60(p=
0_005)と有意 な負の相 関関係 が認 め られた (Fig.5,
6).
HE染
色 に よる組 織 学 的 な切 除肝 の所 見 は生 食 を
高 59.80%,平 均3261± 14.15%で あ り,肝 切48時間後
投与 した ラ ッ トで は正 常肝 と判 断 され,チ オ ア セ タマ
で は 最 低509%,最
イ ドを投与 した ラ ッ トで は 2例 が組織学 的 には慢性肝
高 15.17%,平 均956± 259%で
あ った。
4.肝 線維化率 と Brdu標 識率 との関係
チオ アセ タマ イ ドを投与 した ラ ッ トお よび生食 を投
炎 の像 を皇 し,肝 線維化率 が 7%以 下 であ った。 この
2例 を除 いたチオア セ タマ イ ド投与 ラ ッ トは組織学的
に肝硬変 と診 断 され,肝線維化率 は 7%以 上 であ った。
与 した ラ ッ トの全 例 にお け る肝 線 維 化 率 と Brdu標
硬 変肝 の み を対 象 に して肝 線 維 化 率 と Brdu標 識 率
識 率 との 関 係 を み る と, 肝 切2 4 時間 後 で は r = 一
との関係 をみ る と,肝 切 24時間後 で は r=-0.50(p=
0.048),肝 切48時間後 で は r=-0.53(p=0.037)で
Fig。3 Comparison of hepatic nbrosis index
betH′
een rats treatedith
M′intraperitoneal admin‐
istration Of thioacetamide and saline
は) 4 0
●thioacetaB8ide
■saline
25
20
( p く0 0 0 1 )
15
5
0
圧
Fig.
hr
a:
of
負 の相 関関係 が認 め られた。
察
本邦 にお ける肝細胞癌 の特徴 として,そ の多 くが慢
・
30
10
い て も肝 線 維 化 率 と Brdu標 識 率 との 間 に は有 意 な
IV.考
hepatic flbmsls lndex
3 5 1
あった (Fig.7,8).硬 変肝 のみ を対 象 とした場合 にお
性 の肝疾患 を合併 して い ることが あげ られ る。 日本肝
癌研 究会 の報告 で は肝細胞癌手術症例 の73.7%に ,剖
検症例 の82.1%に 肝硬変 を合併 して い る と報 告 されて
い る1)の
.肝 癌 の治療法 の多 くは肝臓 に侵襲 的 であ るた
め,そ の背景 にあ る慢性 の肝疾 患 に起 因す る肝臓 の機
能 障害 あ るい は機能低下 を無視 す る ことはで きな い。
一
そのた め本邦 の各施認 においては肝癌治療,特 に肝切
4 Immunohistologicalstaining for BrdU of residualliver tissuein rats at24
after partial hepatectomy ( x 40)
rats treated with intraperitonealadministration of thioacetamide,b: doses
saline
1 9 9 6 年3 月
Fig. 5
35(695)
Correlation betM′
een hepatic flbrosis index
and BrdU labeling index of all rats at 24hr after
partial hepatoctomy
BrdU labeling indcx
( )鴨
70
Fig. 7 Correlation betweenhepatic fibrosis index
and BrdU labeling index of rats with histopathologically liver cirrhosis (hepaticfibrosisindex)
7) at 24hr after partial hepatectomy
BrdU labelingindex
( )鴨
60
60
e thicacetan3de
50
口 Satine
50
064o=O lll13)
■‐
40
40
. thioacotamidc
(l ivor oirrhosis)
30
F-0.50 (p{048)
Y-1.20X+4905
30
0
0
5
10
15
20
5
25(%)
10
15
20
hepaticfibrosis index
hcpatic IIbrosis indcx
Fig. 8
Correlation
between hepatic fibrosis index
and BrdU labeling index of all rats at 48hr after
and BrdU labeling index of rats with histopathologically liver cirrhosis (hepatic fibrosisindex >
partial hepatectomy
7) at 48hr after partial hepatectomy
Fig. 6 CorrelatiOn betM′ een hepatic ibrOsis index
BrdU labeling index
BrdU labclitt index
( り
20
( )鴨
20
●thioacetamide
15
■ Salin3
060併 O IX15)
●‐
10
. th iorcetmids
(l iver oirrhosis)
←0 5 3
tp
oo3つ
Y=‐
018Xキ1332
5
0
除 のための肝機能 の評 価法 の研究 が進 め られ てい る。
腹水 の出現 や肝機能 の異常 をきた して 6か 月以 内 に肝
なかで も小 澤 らの動脈血 中 ケ トン体比 を用 いた耐 術能
の判定,肝 機能 のモ ニ タ リング法 3ち岡本 らの重 回帰予
後得点式 に よる評価法 り,水 本 らの総合 的 dskの 算 出
不全状態 に陥 って在院死 す る症例 もあ る。術後早期 の
に よる手術 危険度 の判定 め,野 口 らの残 存肝 Rmaxに
よる残存 肝 予備力 の評価 法 611ま
,肝 臓 の機 能 的予備 力
た め,特 に硬変肝 の肝切 除 において は術 前 に残存肝 の
に着 目 した評価法 として有用 と考 え られ る。
当科 で も肝細胞癌 の治療,特 に肝切 除手術 に際 して
は,こ れ らの優 れた評価 法 を参考 に して肝臓 の機能的
予後判定 のみな らず長期予後 の予測 も重 要 と考 え られ
る。肝切 除後長期予後 は肝 再生 と密接 に関係 して い る
再生能 を評価 す る ことがで きれ ば臨床上 極 めて有用 で
あ る。 しか しこれ まで肝再生能 の評価法 については若
11)12Hの
みで,ま だ確立 した方法 は
干 の報告 が見 られ る
い
な 。
予備力 を中心 に術 前評価 を行 ってい る.し か し実 際 に
昨今,肝 硬 変 の病 態 について分子生 物学 的 な研究 が
は術 後早期 は耐術 して も,術 後, 1か 月以 降 に難治性
行 われ,肝 硬変 の形 成 に関係 して い るサイ トカイ ンの
36(696)
肝線維化率か らみた硬 変肝切除後 の肝再生能
ネ ッ トワー クにつ い て も徐 々 に解明 されつつ あ る。松
本 らは肝硬変 の発症 機構 のモデル として,長 期 的 な肝
障害 が あ ることに よ り,主 に肝臓 の非実質細胞 におい
て TGF β が慢性 的 に産生 され る.こ れ は hepatocyte
産生 を抑制 す るこ とによ り,
また直接作用 し肝 実質細胞 の増殖 を抑 制 す る。 一 方,
growth factor(HGF)の
日消外会誌 29巻
3号
膠 原線維 を染色 し,そ の他 の蛋 白を fast greenを用 い
て染色 す る方法 を考案 して い る1ゆ
.こ の方 法 で は dr_
ius redによ リコ ラー ゲ ン I,IIIに加 え,コ ラー ゲ ンIV
も染色 され る点 で アザ ン染色 よ りも有用 との報 告 14)が
あ る。肝臓 の間質 を構成 す る膠 原線維 は主 に コラー ゲ
ン I,IIIで あ るが,コ ラー ゲ ンIVも含有 して い るこ と
TGF‐β はォ ー トク リン機構 で肝非実質細胞 に作用 し,
よ り,染 色 の手 間 を考慮 に入 れ なけれ ば この 方法 も有
膠原線維 な どの細胞 間物 質 の産生 を促 し肝臓 の線 維化
を促進 す る と報告 されて い る13).肝
細胞 の増殖抑制,す
用 と考 え られ る。
なわ ち肝再生 の抑 制 と肝臓 の線維化 は TGF‐β を介 し
率 を用 いた。 ブ ロモ デオキ シウ リジ ン (BrdU)は チ ミ
ジ ンの類似物 で,核 酸 を構成 す る一 要素 として S期 の
て進 行 す る と考 え られ る.
著者 は肝切除後 の肝再生能 を術前 に予測 しうる因子
として,硬 変肝 の形成,肝 細胞 の増 殖抑制 に関係 して
い る TGBβ のいわ ば発現像 と考 え られ る肝臓 の線維
今 回 の検 討 で は肝 再 生 能 の指 標 として BrdU標 識
細胞 の DNA中
へ取 り込 まれ る性質 を有す る。核 内 に
BrdUを 含 む細胞 ,す なわ ち BrdU標 識細胞 は S期 に
あ る増殖活性 を有 す る細胞 として とらえ られ る。 ラ ッ
化 に注 目 した。線 維化 の程度 に よる硬変肝切 除後 の肝
トで は部分肝切 除後 の肝再生 は残肝細胞 の増殖活性 に
再 生 能 の術 前評 価 法 として の有 用性 につ い て 研 究 し
よって決定 され るた め,BrdU標
た。
肝臓 の線維化 の程度 の評 価 法 として,従 来 よ り肝生
能 の指標 とした。肝切 除後 の残 存細胞 が S期 に入 る と
10手 24時
報告 され て い る
術
間後 にチオアセタマ イ ド投
検 や肝切 除 した組織 を特殊染色 して,そ れ を鏡検 して
判 断す る方法が行 われて い る。し か しこの方法 に よる
与 ラ ッ ト13匹 と生 食投与 ラッ ト5匹 を,48時 間後 にそ
れ ぞれ13匹 と 4匹 を大量 ネ ンブ ター ル 注入 に よ り屠殺
線 維 化 の程 度 の診 断 は診 断者 の主 観 に よって影 響 さ
した。切 除肝 の肝線 維化率 と肝 再生能 の指標 として測
れ ,よ り客観 的 に評価 す る方法が必要 であ る。 また膠
定 した BrdU標 識 率 とを肝 切 24時 間 お よび48時 間 後
原線 維 を よ り選択 的 に染 色 す る特 殊 染 色 も求 め られ
る。組織 の修原線 維染色法 として は,フ ァン ・ギ ィー
が得 られた、 つ ま り正 常肝 よ り硬変肝 へ線維化率 が増
ソン染色法,マ ッソ ン ・トリク ロー ム染色法,ア ザ ン
加 す るにつ れて,術 後 の肝再生能 が減少す る こ とを示
識 率 を もって肝再 生
の時点 で検討 す る と,統 計学 的 に有意 な負の相 関関係
染色 法 な どが あ るが ,著 者 は比較的簡便 なアザ ン染色
して い る。 しか しこれ は正 常肝 も対 象 に入れた 関係 で
法 を用 いた。アザ ン染色法 で は膠原線 維 は濃 い青色 に,
あ り,当 然 の結果 とも言 える。 そ こで次 に硬変肝,す
細 網線維 は淡 い青色 に,そ して細胞 の核 は赤色 に,細
胞 質 は淡 い赤色 に分別染色 され る.画 像解析装置 で は
線維化率 と Brdu標 識率 との関係 を検討 した。肝切 24
取 り込 んだ画面上 で,色 を選択 して binalizadonを す
時間後 で も48時間後 で も,肝 線維化率 と Brdu標 識 率
なわ ち肝線維化率 7%以 上 の ラ ッ ト肝 を対 象 に して肝
る観点 か ら,ア ザ ン染色 による青 と赤 の明陳 な色分 け
との 間 に は統 計 学 的 に有 意 な負 の相 関 関係 が 認 め ら
は膠原線 維 の検 出 に大変有用 で あ る。 アザ ン染色 で使
用す るアニ リン青 は再溶 出 させ て その量 を測 定 す る と
コラー ゲ ン I,IIIの量 と相 関す る と報告 されてお り14ち
青 く染色 された領域 の面積 は コ ラー ゲ ン I,IIIの 量 を
れ,硬 変肝 の 中 で も線維化率 の増加 に応 じて肝再生能
反映 してい る と考 え られ る。 自動画像解析装置 による
が低下す る ことが示唆 された.こ れ に よ り硬変肝 で は
術 前 の生 検 に よって肝 線 維化 率 を測 定 す る こ とに よ
り,肝 切 除後 の残肝 の再生能 を評 価 で きる と考 え られ
る。
膠原線維 の検 出 は肝線維化 の程度 をほぼ定量 的 に測定
肝線維化 の程度 を肝 生検 によ らず血液検査 のみで知
して い る と考 え られ る。硬変肝切 除後 の肝再生能 の評
る ことがで きるな らば,さ らに非 侵襲性 で有 用で あ る。
価 のた め,術 前 に肝生検 で採取 した組織標本 にアザ ン
現在最 も注 目され て い るのは N‐terminal propepdde
染色 を行 い,自 動画像解析装置 を用 いて肝線維化率 を
of type III procollagen(以
下,PIIIP)で あ るが,PIIIP
短時間 に,簡 便 に,客 観 的 に測定 す る ことは臨床 的 に
は肝 臓 の線 維 化 の程 度 とよ く相 関 す る との 報 告 が あ
∼
る1つ211し か し,肝 線維化 の程度 よ りも肝硬変 の臨床
病期 に相 関 して変動 してい る との反対意見 もあ る2の
.
その他 ラ ミエ ン,ヒ アル ロン酸 な ども単独 で は肝線 維
極 めて有用 と考 える。著者 は組織染色 にアザ ン染色 を
用 いたが,Jimenezら はフ ァン ・ギ ィー ソン染色法 で
使 用 す る picric acidの代 わ りに sirius redを用 い て
37(697)
1996年3月
化 の程 度 を測 定 す る こ とは 困難 で あ る と考 え られ る。
Shimadaら
は末 梢 血 中 の血 小 板 数 ,性 別 ,HPT,Pugh'
s score,ICG R15の
値 を組 み合 わ せ た 関数 式 に よ り
FibroSs scoreを 求 め て ,肝 線 維 化 の程 度 を推 測 し よ
23L
う と試 み て い る
今 回,硬 変肝 切 除 の 際 に,肝 生検 に よ り組 織 を採 取
して 自動 画像 解 析 装 置 を用 い て 半 定 量 的 に測 定 す る肝
線 維 化 率 が 術 後 の残 肝 の再 生 能 を予 測 で き るか ど う
か ,ラ ッ トで硬 変 肝 を作 って基 礎 的 実験 を行 った ,そ
の 有 用性 は確 認 す る こ とが で きた が ,こ の肝 線 維 化 率
が 肝 組 織 内 TGF‐ β と相 関 す るか ど うか の検 討 は行 っ
て い な い 。 今 後 は実 際 の 臨 床 にお け る本 法 の意 義 を検
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討 して い くつ も りで あ る。
本論文 の要 旨は,第 95回 日本外科学会総会 (1995年4月 ,
名古屋市)な らびに第46回 日本消化器外科学会総会 (1995年
7月 ,福 井市)に おいて発表 した。
文 献
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3号
The Grade of Hepatic Fibrosis as a Predictor of Regeneration Activity after
Partial Hepatectomy to Liver Cirrhosis in the Rat
Yuichi Hatakeyama, Toshiyuki Ono and Rikiya Abe
The Second Department of Surgery, Fukushima Medical College
Liver resection is the most effective method of therapy for hepatocellular carcinoma. We need
accurate information about the liver function before liver resection, becausemost patients with hepatocellular carcinoma have associated liver cirrhosis in Japan. It has recently been reported that Transforming
Growth Factor-B (TGF B), which promotes liver fibrosis and suppressesthe growth of hepatocytes, is
related to the development of liver cirrhosis. So we focused our attention on liver fibrosis resulting from
TGF-F, and investigated whether the extent of hepatic fibrosis (hepatic fibrosis index) might be correlated rvith hepatic regeneration activity after partial hepatecotmy in rats with thioacetamide-induced liver
disease.Two groups of male Wistar rats (5 wk old) (10 to 30/group) were treated for 10 wk by weekly
intraperitoneal administration of thioacetamide (200 mg/kg, 3 times/wk) or saline. A11rats then underwent 70(%hepatectomy under pentobarbital anesthesia.Hepatic regeneration activity was determined 24
and 48 hours after parital hepatectomy by means of bromodeoxyuridine incorporation into DNA. The
hepatic fibrosis index was semiquantitatively calculated at the time of partial hepatectomy by automated
images analysis on Azan-stained liver tissue. A significant inverse correlation was found between the
hepatic fibrosis index and DNA synthesis in all rats (thioacetamide-treated and saline-treated) 24 and 48
hours after partial hepatectomy (r:-0.64
and -0.60, respectively; p<0.05), and also an inverse
correlation existed even in the rats with treated thioacetamids (r:-0.50
and -0.53 at 24 and,48 hr,
respectively). In conclusion, it is considered that the preoperative quantitation of hepatic fibrosis by
automated image analysis will enable us to predict hepatic regeneration activity after cirrhotic liver
resection.
Reprint requests: Yuichi Hatakeyama The Second Department of Surgery, Fukushima Medical
College
1 Hikarigaoka, Fukushima, 960-12 JAPAN