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Quantum Prep
プラスミドプレップキット
トラブルシューティング
問 題
考えられる原因 確認してください
Trouble Shooting
解決方法
ローコピー
プラスミド
ローコピープラス
ミドを使用していま
せんか？
濃厚培地を使用し、細胞量を増やしてくださ
い。もしくはハイコピープラスミドを使用
してみてください。
細胞数が
不十分
大腸菌のオーバー
ナイト培養していま
すか？
濃厚な培地を使用してください；培養時間、
容量を調節してください。OD 600 を測定し
OD ／ml を確認してください。
培養液が
古い
大腸菌はどのようなも
のを使用していますか?
単離した大腸菌を 37 ℃でオーバーナイト培
養し、培養後すぐに使用してください。
回収されて
いない
マトリクスに吸着さ
れているか確認する
溶出バッファー（dw か TE）を 70 ℃に温めて
溶出してください。溶出バッファー量を増や
す、あるいは 2回にして溶出してください。
ゲノムの
コンタミネーション
低から高分子量のス
メアがありますか？
溶菌後なるべく穏やかに懸濁してください。
培養液を減らしてください。
Endonuclease A
のコンタミネーション
低分子量のスメアが
ありますか？
洗浄ステップの回数を増やしてください。
ホスト株を変えてみてください。
細胞のオーバー
ロード；Cell
Resuspension
Solution の劣化
260／280＞2.0で
すか? 泳動した際、ゲ
ルに低分子量のバン
ドが見られますか?
オーバーロードを避けてください；新しい
CellResuspensionSolution を用いてくだ
さい。
（CellResuspensionSolution には
RNaseが含まれています）
タンパク質のコン 細胞構成タンパク
タミネーション
が混入している
260 ／280 ＜1.5
ですか？
クリアライセートを回収する際、白色の沈殿
が混入しないように気をつけてください。
スピンカラム
からマトリク
スが漏れる
キット指定の速度で遠心してください。rpm
遠 心 機 の 回 転 速 度 （revolutions per minute）への変換方法
（rpm）2 r
は速すぎませんか？ RCF（g）=（1.12×10-5 ）
r：ローターの中央からチューブの中央までの半径（cm）
回収率が
低い
スメアリング
RNA コンタ
ミネーション
スピンバスケット
の破損
遠心をした際マ
スピンバスケットへ
トリクスが遠心
のオーバーロード
機内に飛び散る
マトリクス＋クリア
ライセートの量が
多すぎませんか？
マトリクス＋クリアライセート懸濁液がスピ
ンカラムに入りきらない場合は遠心を 2 回に
分けて行なってください。
塩基配列が
決定出来ない
泳動によるバンドの
確認をしていますか?
260 ／280 比率測
定していますか？
培養のOD600 を確認してください。細胞の
オーバーロードを避けてください。
260／280比率を測定し、
260／280＜1.5 の場合はタンパク質、
260／280＞2.0 の場合はRNAが混入し
ている可能性があります。
精製度が不十分
日本バイオ・ラッド ラボラトリーズ株式会社
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