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DTS Systems
6. Une fois le portoir dans le bain-marie, retirez soigneusement la carte de protection et, à
l’aide du pipeteur à répétition, ajoutez 25 µL du réactif enzymatique reconstitué dans
chaque tube réactionnel. Tous les mélanges réactionnels doivent maintenant avoir une
teinte orange.
7. Couvrez immédiatement les tubes avec une nouvelle carte de protection, retirez le
portoir du bain-marie et mélangez les tubes réactionnels en agitant délicatement le
portoir manuellement.
8. Faites incuber le portoir à 42 °C ± 1 °C dans un bain-marie pendant 60 ± 15 minutes.
E. Double test cinétique (Dual Kinetic Assay, DKA)
Si vous utilisez le bain à chaleur sèche/vortexeur SB100 (SB100 Dry Heat Bath/
Vortexer), référez-vous à la fiche d’application du SB100.
Le pipeteur à répétition utilisé pour l’hybridation et la sélection doit être réservé à ces
étapes uniquement. Voir Avertissements et précautions.
1. Hybridation
a. Retirez le portoir du bain-marie et transférez-le dans la zone de test DKA. À l’aide du
pipeteur à répétition, ajoutez 100 µL du réactif-sonde reconstitué dans chaque tube
réactionnel. Tous les mélanges réactionnels doivent maintenant avoir une teinte jaune.
b. Couvrez les tubes avec une carte de protection et vortexez-les sur le vortexeur
(mélangeur à tourbillon multi-tubes).
c. Faites incuber le portoir dans un bain-marie à 62 °C ± 1 °C pendant 20 ± 5 minutes.
d. Retirez le portoir du bain-marie et laissez incuber à température ambiante pendant
5 ± 1 minutes.
2. Sélection
a. A l’aide du pipeteur à répétition, ajoutez 250 µL de réactif de sélection dans chaque tube
réactionnel. Tous les mélanges réactionnels doivent maintenant avoir une teinte rouge.
b. Couvrez les tubes avec une carte de protection, vortexez le portoir pendant 10
secondes ou jusqu’à l’obtention d’une teinte uniforme, puis incubez-le dans un bainmarie à 62 °C ± 1 °C pendant 10 ± 1 minutes.
c. Retirez le portoir du bain-marie.
3. Détection
La détection doit être effectuée entre 18 °C et 28 °C.
a. Incubez le portoir entre 18 °C et 28 °C pendant 15 ± 3 minutes.
Remarque : Cette plage de température est indispensable pour la performance du test.
b. Pour utiliser le LEADER HC+ Luminometer et le logiciel de test APTIMA, référezvous au Manuel de l’opérateur du luminomètre LEADER HC+ (LEADER HC+
Luminometer Operator’s Manual) ainsi qu’au Manuel de l’opérateur du logiciel de
test APTIMA (APTIMA Assay Software Operator’s Manual).
c. Vérifiez que les volumes d’Auto Detect 1 et 2 sont suffisants pour effectuer les tests.
d. Préparez le LEADER HC+ Luminometer en plaçant une unité TTU vide dans la
position de cassette numéro 1 et effectuez le protocole de Wash (Lavage).
e. Chargez les unités TTU dans le luminomètre.
f.
Connectez-vous à l’ordinateur. Cliquez sur New Run (nouvelle série), choisissez le
protocole de test APTIMA COMBO 2 puis entrez le nombre de tubes (contrôles et
échantillons). Cliquez sur Next (suivant) pour commencer la série.
Test APTIMA COMBO 2
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502183FR Rév. C