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Stammlösung:
Celecoxib (Reinstoff); 5,1 mg einwiegen in 100 ml Acetonitril/Wasser 50/50
und lösen → Konzentration 50 µg/ml
Interner Standard:
Celecoxib (Reinstoff); 5,1 mg einwiegen, in 100 ml Acetonitril/Wasser 50/50
lösen → Konzentration 50 µg/ml Verdünnungsreihe des Standards von 0 bis
2000 µg/l Celecoxib
Probenvorbereitung:
1 ml Leerplasma
100 µl Acetonitril/Wasser (50/50) bzw. 100 µl Eichlösung
100 µl Interner Standard (= Rofecoxib Reinsubstanz) 4000 ng/ml
1 ml 0, 1 M Acetatpuffer pH 5
4 ml Dichlormethan/Hexan (50/50)
zugeben und 15 min. schütteln
10 min. zentrifugieren bei 4000 U/min
maximales Volumen abpipettieren
mit Stickstoff abblasen (Wasserbad 40°C)
Proben in 500 µl Fließmittel aufnehmen
Injektion: 100 µl Probe
Chromatographische Bedingungen:
Filter-Chromcart HPLC-Vorsäule, Nucleosil 120-5 C8, Macherey & Nagel
Fließmittel:
Methanol/Wasser 50/50, 1% Essigsäure
Fluss:
0,2 ml/min
Massen:
Celecoxib:
M+1 (=Mutterion) m/z 382.4
CID (collision-induced dissociation energy) 28%
geht über in Produkt (=Tochterion) m/z 362
Rofecoxib:
M+1 (=Mutterion) m/z 315.4
CID (collision-induced dissociation energy) 20%
geht über in Produkt (=Tochterion) m/z 297.0
Methode Massenspektrometrie:
APCI-Source optimiert auf:
Vaporizer Temp [°C]
450
Sheath Gas Flow Rate [arb]
80
Aux Gas Fiow Rate [arb]
40
Corona Discharge Current [µA]
5
Capillary Temp [°C]
140
Capillary Voltage [V]
13
Tube Lens Offset [V]
13