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Contents
Chapter 1
Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
About This Manual . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
Related User Documents . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
Assay Overview . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
How it Works . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
Performance Highlights . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Safety Warnings and Precautions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Required Materials . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
QuantiGene ViewRNA ISH Tissue Assay Kit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
QuantiGene ViewRNA Probe Sets . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
Required Materials and Equipment Not Provided . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
Microscopy and Imaging Equipment Guidelines for QuantiGene ViewRNA ISH Tissue Assay . 7
Chapter 2
Assay Guidelines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
Tissue Preparation Guidelines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
Experimental Design Guidelines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
Probe Set Considerations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
Chapter 3
QuantiGene ViewRNA ISH Tissue Assay Procedure . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
About the QuantiGene ViewRNA ISH Tissue Assay Procedure . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
Important Procedural Notes and Guidelines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11
Essential Keys for a Successful Assay . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
Part 1: Sample Preparation and Target Probe Hybridization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
Part 1 Procedure . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
Part 2: Signal Amplification and Detection . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
Part 2 Procedure . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
Chapter 4
Troubleshooting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
Contacting Technical Support . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
Weak or No Signals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
Diffused Signals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
Poor Cell Morphology . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
Tissue Detachment from Slide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
High Non-Specific Binding on Glass Slide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
Hydrophobic Barrier Falls Off . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
High Background . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23