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Informations générales
La première génération de NAAT pour CT présentait des problèmes techniques qui en ont
limité la performance. Ces problèmes étaient notamment liés à des difficultés de traitement
des échantillons et à leur inhibition pouvant introduire des résultats faussement négatifs (6,
12, 16, 19, 25, 27). Le test APTIMA pour Chlamydia trachomatis (test CT APTIMA) est un
NAAT de deuxième génération qui utilise les techniques de capture de cible, d’amplification
par transcription (Transcription-Mediated Amplification, TMA), ainsi que le test de protection
de l’hybridation (Hybridization Protection Assay, HPA) pour simplifier le traitement des
échantillons, amplifier le rRNA cible et détecter l’amplicon, respectivement. Des études
récentes comparant la performance et l’inhibition des échantillons avec divers systèmes
d’amplification ont démontré les avantages des techniques de capture de cible, de TMA, et
de HPA (7, 11).
Conformément aux directives de dépistage de Chlamydia trachomatis et Neisseria
gonorrhoeae publiées en 2002, les CDC recommandent un certain nombre d’options de suivi
après un test de dépistage positif « si l’on peut s’attendre à une valeur prédictive posiitve
faible ou si un résultat faussement positif risque d’entraîner de sérieuses répercussions
psychosociales ou légales » (4). L’une de ces options de tests supplémentaires peut
consister à utiliser un test d’amplification de l’acide nucléique autorisé par la FDA qui
ciblerait une autre séquence d’acide nucléique que celle du test initial. Le test CT APTIMA
cible des séquences d’acides nucléiques différentes de celles ciblées par les autres tests
NAAT pour C. trachomatis, y compris le test APTIMA COMBO 2.
Principes de la procédure
Le test CT APTIMA associe les techniques de la capture de cible, de la TMA et du HPA.
Les échantillons sont collectés et transférés dans leurs tubes de transport d’échantillon
respectifs. La solution de transport de ces tubes libère la cible rRNA et l’empêche de se
détériorer pendant la période de conservation. Lorsque le test CT APTIMA est effectué en
laboratoire, la molécule rRNA cible est isolée des échantillons à l’aide de microparticules
magnétiques en utilisant un oligomère de capture par la méthode dite de « capture de
cible ». L’oligomère de capture contient une séquence complémentaire à une région précise
de la molécule cible, de même qu’une chaîne de résidus de déoxyadénosine. Lors de l’étape
d’hybridation, la région spécifique de la séquence de l’oligomère de capture se fixe sur une
région précise de la molécule cible. Le complexe oligomère/capture de cible est ensuite
capturé hors de la solution en ramenant la température de la réaction à température
ambiante. Cette réduction de température permet à l’hybridation de se produire entre la
région désoxyadénosine de l’oligomère de capture et les molécules poly-désoxythimidines
liées covalentement aux particules magnétiques. Les microparticules, y compris les
molécules cible capturées auxquelles elles sont liées, sont attirées vers la paroi du tube à
réaction par des aimants, et le surnageant est aspiré. Les particules sont lavées afin
d’éliminer la matrice résiduelle de l’échantillon qui peut contenir des inhibiteurs de la réaction
d’amplification. Une fois les étapes de capture de cible terminées, les échantillons sont prêts
à l’amplification.
Les tests d’amplification de cible reposent sur la capacité des amorces d’oligonucléotides
complémentaires de tremper spécifiquement et de permettre l’amplification enzymatique des
brins de l’acide nucléique cible. La réaction TMA de Gen-Probe réplique une région
spécifique du rRNA 16S de CT via des formes intermédiaires de DNA. On utilise un seul jeu
d’amorces pour chaque molécule cible. La détection des séquences du produit de
l’amplification du rRNA (amplicon) s’effectue par l’hybridation de l’acide nucléique. Une
sonde DNA chimiluminescente monocaténaire, qui est complémentaire à une région de
l’amplicon cible, est marquée avec une molécule d’ester d’acridinium. La sonde DNA
marquée se combine à l’amplicon pour former des hybrides RNA:DNA stables. Le réactif de
APTIMA Chlamydia trachomatis Assay
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502184FR Rev. D